pin1介导高氧诱导人肺泡上皮细胞凋亡中sirt1核-浆穿梭改变

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1、万方数据四川I医科大学硕士学位论文本研究基金来源：1．中华儿科杂志第二届双鹤珂立苏科研基金(编号：cjp一009)2．四川省教育厅科研项目基金(编号：08ZAl50—033)3．四川省卫生厅科研基金(编号：110340)4．泸州市科技局(泸州市政府．泸州医学院联合专项资金)(编号：2013LZLY·--j08)5．四川省科技厅项目(编号：4ZQOlO一023)万方数据四川医科大学硕士学位论文目录Pinl介导高氧诱导人肺泡上皮细胞凋亡中SIRTl核一浆穿梭改变⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

2、⋯⋯1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3前。言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯5利【吞⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯j材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯7结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯16讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯21结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯25参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯26英汉缩略词对照表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯32致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．33SIRTl在炎症

3、反应和细胞衰老的研究进展(综述)⋯⋯34攻读硕士学位期间发表和撰写的文章⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯57l23456789●lL1l1l1l234万方数据Pin1介导高氧诱导人肺泡上皮细胞凋亡中SlR11核一浆穿梭改变摘要目的：Pinl是人类肽基脯氨酰异构酶，实验组前期发现，Pinl参与细胞氧化应激通路，抑制其表达后可能够减少高氧所造成的肺损伤，而SIRTl称为沉默交配型信息调节因子2同源蛋白1，主要定位于细胞核中，其发挥活性参与调节细胞氧化应激过程。本实验建立在稳定抑制肽基脯氨酰顺反异构酶(Pinl)表达的A549细胞系基础上，当暴露于高氧环境下，SIRTl能否发

4、生核一浆穿梭反应，导致SIRTl活性降低，抗氧化应激能力下降，增加高氧肺损伤可能，而在抑制了Pinl表达的A549细胞中能否减轻SIRTl核一浆穿梭反应，从而减轻高氧肺损伤。方法：通过本实验组前期实验获得稳定抑制Pinl表达的A549一PinlshRNA细胞系。随后将实验分为三组：对照组、高氧组，A549一PinlshRNA组。对照组是通过含有10％胎牛血清和1％青链霉素的1640培养基中常规培养。高氧组及A549一PinlshRNA组均通过通入3L／min的95％氧气和5％--氧化碳高纯混合气lOmin，并在培养箱中密培养24h的高体积分数氧(高氧)诱导

5、细胞。培养结束后收集细胞进行以下检测：倒置相差显微镜下观察各组细胞的形态学改变；采用SP细胞免疫化学方法检测各组细胞中Caspase3、p53蛋白的表达；荧光显微镜检测定位SIRTl核一浆穿梭情况。万方数据结果：(1)在倒置显微镜下，对照组细胞生长状态良好，细胞活性好，活细胞数量多，少见细胞漂浮于培养基中，细胞呈梭形。，细胞间隙较小，连接紧密。高氧组细胞生长状态差，活细胞明显较对照组明显减少，培养基中可见大量细胞漂浮，剩下的活细胞排列松散，细胞间隙较前明显增宽。而A549一PinlshRNA组生长状态欠佳，活细胞数量较高氧组多，悬浮在培养基中的细胞较高氧组

6、少，但未达到对照组水平；(2)SP细胞免疫化学方法检测各组细胞中Caspase3、p53蛋白的表达：高氧组与对照组相比，Caspase3、p53蛋白表达明显增加，差异有统计学意义(P(O．05)；而A549一PinlshRNA组中Caspase3、p53蛋白表达较前有所降低，其值介于高氧组与对照组之间，与高氧组、对照组相比差异有统计学意义(P<0．05)；(3)荧光显微镜检测定位SIRTl核一浆穿梭情况：细胞核染成蓝色荧光，SIRTl染色成红色荧光，其在细胞质及细胞核内均有表达，而主要是在细胞核中发挥其作用。对照组细胞质中红色荧光表达微弱，而高氧组中细胞质

7、红色荧光表达最强，在A549一PinlshRNA组红色荧光含量较对照组有所增多，差异有显著性(P

8、huttleinPinlmediatedhyperoxiaindu