沙眼衣原体感染诱生活性氧对l929细胞坏死的影响

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1、温州医学院硕士学位论文沙眼衣原体感染诱生活性氧对L929细胞坏死的影响姓名：刘文文申请学位级别：硕士专业：免疫学指导教师：吕建新；周晓辉2012-05-12沙眼衣原体感染诱生活性氧对L929细胞坏死的影响中文摘要目的沙眼衣原体是目前性传播疾病的最主要的细菌性病原体，其感染还可以导致其他多种疾病。因此，衣原体与宿主细胞相互作用的分子机制成为国内外医学研究的热点之一。现有研究提示，病原体感染过程中抑制或诱导宿主细胞的死亡对其感染复制、致病及预后有深刻的影响。本课题即拟观察沙眼衣原体感染诱生的活性氧(Reactiveoxygenspecies，ROS)对L9

2、29细胞坏死的影响，从而为深入探讨沙眼衣原体感染与细胞死亡通路相互作用的机制提供初步线索。方法1在Hela229细胞中培养沙眼衣原体小鼠生物型(Ch肠mydiaMurida朋m)，以姬姆萨染色方法对进行检测、应用不连续密度梯度方法纯化沙眼衣原体及使用间接免疫荧光方法测定沙眼衣原体滴度(即FU)。2以Cmu舭m感染L929细胞，对照组未感染。感染后0h、12h、24h收集L929细胞，应用CM-H2DCFDA染色流式检测ROS的产生。3用Cmurida似m感染L929细胞，对照组未感染。感染后0h、12h、24h收集L929细胞，应用Propodiumi

3、odide(PI)+AnnexinV．FⅡtC染色流式检测细胞坏死率。4用Cmurida丌lm感染L929细胞，对照组未感染。感染后Oh、12h、24h收集L929细胞提取总的RNA，荧光定量检测沙眼衣原体16SrRNA的表达。5DPI处理感染Cmurida删m的L929细胞，对照组为感染Cmurida删m的L929细胞和未感染的L929细胞。收集细胞检测细胞ROS、Caspase一1活性、沙眼衣原体16SrRNA、细胞坏死率。结果1C．，，z甜r池朋聊感染L929细胞，发现在12h、24h两个检测时间点，感染组的ROS、细胞坏死率、沙眼衣原体16Sr

4、RNA水平与未感染对照组相比都有显著增加，而且随时间延长增加趋势加大(P<0．05)。2用药物DPI处理感染的L929细胞，DPI处理组与未处理对照组的相比不但ROS水平降低，而且伴随着细胞坏死率、C唧ase一1活性、沙眼衣原体16SrRNA水平的降低(P<0．05)。温州医学院硕士学位论文结论综上所述，本研究发现沙眼衣原体感染诱生的活性氧一定程度上促进了L929细胞的坏死。关键词沙眼衣原体；活性氧；细胞坏死温州医学院硕士学位论文ReactiveoxygenspeciesmediatednecrosisofhostcellsinducedbyChlam

5、ydiatrachomatisinfectionABSTRACTobjectiveInhibitionorinductionofhost-celldeathhasbeenreportedformanypathogensandisthoughttoplayanimportantroleinpropagationorpathogenesisofinfection．Asanmostcommonagentofbactorialsexually-transmitteddiseaseintheworld，Chlamydiatrachomatisinteractin

6、gwithcelldeathpathwayismuchaccountedofresearchesinthefiledofinfectiousdiseases．Therefore，thisworkaimedtoexploretheinfluenceofreactiveoxygenspeciestonecrosisofL929cellsinducedbyChlamydiatrachomatisinfection．Method1ChlamydiaMuridarumwasamplifiedinHeLacells；GiemsastainingWasapplied

7、toexaminetheinclusionsofC．muridarum；ElementarybodiesofChlamydiaMuridarumwerepurifiedbydiscontinueddensitygradientcentrifugation；andbacterialloadsweredeterminedbyindirectimmunofluorescence．2L929cellswereinfectedormock—infectedbyChlamydiamuridarum，andcollectedattheOh，12hand24hpost

8、-infection．ROSproductionwasmeasuredbyROS-sensti