小鼠沙眼衣原体肺炎的诱生及检测

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1、小鼠沙眼衣原体肺炎的诱生及检测【关键词】小鼠沙眼衣原体肺炎　　【摘要】目的探讨沙眼衣原体小鼠肺炎感染模型的建立及检测。方法用沙眼衣原体小鼠肺炎株（MoPn）鼻腔吸入感染C57BL/6小鼠。用过氧化物酶连接的鼠抗衣原体脂多糖单抗染色及RT-PCR，检测衣原体在小鼠肺组织的生长;通过肺组织髓过氧化物酶检测，确定肺炎症细胞类型。结果一定剂量的衣原体MoPn经鼻腔吸入可引起小鼠衣原体肺炎，以肺组织衣原体生长及肺组织大量中性粒细胞浸润为特征。结论小鼠可作为研究沙眼衣原体肺炎有价值的动物模型。　　【关键词】沙眼衣原体小鼠肺炎髓过氧化物酶E

2、stablishmentanddetectiontoChlamydiatrachomatispneumonitisofthemouse　　【Abstract】ObjectiveToestablishamousemodelofChlamydiatrachomatispneumonitisandinvestigatethedetectivemethod.MethodsPneumonitisydiatrachomatismousepneu-monitis（MoPn）biovarinC57BL/6mice.Chlamydiagroin

3、edbychlamydiainfectivityandchlamydiamRNAexpressioninthelungs.Lunginflammatorycelltypeinedbylungmyeloperoxidaseassay.TheinfectionedbyinoculatingHela229cellmonolayerogenatesfolloydiaLPSmAb.ResultsIntranasallyinfectedatisMoPninmiceresultedinChlamydiamousepneumonitisfea

4、turedbychlamydiagroassiveinfiltrationofneutrophilsinthelung.ConclusionMicemayserveasausefulanimalmodelforthestudyoftheChlamydiatrachomatispneumonitis.　　【Keyydiatrachomatismousepneumonitismyeloperoxidase　　沙眼衣原体小鼠肺炎菌株（MoPn）是小鼠肺炎的天然病原体，最初是从小鼠肺组织分离得到的，所以MoPn感染的小鼠模型最常用于研

5、究衣原体体内感染。本研究以MoPn通过呼吸道感染易感小鼠，并通过检测衣原体在肺组织中的生长及肺组织炎症细胞的浸润，对小鼠衣原体肺炎进行检测和鉴定。　　1材料与方法　　1.1沙眼衣原体菌株MoPn生长于HeLa229细胞，用不连续密度梯度离心法纯化衣原体，进行活性测定后用于感染小鼠。　　1.2感染小鼠6～8周龄雌性C57BL/6小鼠（中国医学科学院血液病研究所提供），在微麻状态下鼻腔内吸入40μl含1×103包涵体形成单位（IFU）的MoPn。　　1.3肺组织上清液中衣原体活性测定无菌采集小鼠肺组织右叶，制备成组织匀浆，离心。用

6、肺组织上清液滴定HeLa细胞单层。用连接有过氧化物酶的鼠抗衣原体脂多糖单抗（anti-LPSmAb）（Virostat）染色，以鉴定衣原体的感染性，感染强度以IFU表示［1］。　　1.4肺组织髓过氧化物酶（Myeloperoxidase，MPO）检测［2］制备肺组织匀浆，沉淀物超声粉碎。上清液与25μlTMB底物液反应，以人髓过氧化物酶做标准品，在全自动酶标仪上读取650nmOD值。　　1.5MoPnmRNA的表达RT-PCR检测小鼠肺组织沙眼衣原体MoPnmRNA表达。　　2结果　　2.1MoPn感染后小鼠肺组织衣原体生长见

7、图1。图1显示，在感染后第2天，小鼠肺组织可检测到衣原体生长，IFU值增高。衣原体生长在感染后第7天达高峰，4只小鼠肺组织均检测到衣原体MoPnmRNA表达，见图2。　　图1衣原体感染C57BL/6小鼠肺组织衣原体活性略　　图2小鼠呼吸道沙眼衣原体感染后肺组织衣原体MoPnmRNA表达略　　2.2中性粒细胞髓过氧化物酶（MPO）检测C57BL/6小鼠呼吸道感染衣原体MoPn后第2天，肺组织MPO活性明显增高（P<0.01），至第3天达高峰，以后逐渐下降，感染后21天恢复正常水平（图未显示）。说明中性粒细胞于感染后第2天在

8、肺组织大量聚集。　　3讨论　　沙眼衣原体是影响人类健康的重要病原体，随着临床衣原体感染性疾病的日益增多，迫切需要深入了解衣原体感染的保护性免疫学机制。近年来，使用感染的动物模型在阐明衣原体感染的免疫生物学上取得了重要的研究进展。本研究采用适宜剂量的沙眼衣原体小鼠肺炎株，通过鼻