小鼠沙眼衣原体肺炎的诱生及检测

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1、小鼠沙眼衣原体肺炎的诱生及检测【关键词】小鼠沙眼衣原体肺炎　　【摘要】目的探讨沙眼衣原体小鼠肺炎感染模型的建立及检测。方法用沙眼衣原体小鼠肺炎株（MoPn）鼻腔吸入感染C57BL/6小鼠。用过氧化物酶连接的鼠抗衣原体脂多糖单抗染色及RT-PCR，检测衣原体在小鼠肺组织的生长;通过肺组织髓过氧化物酶检测，确定肺炎症细胞类型。结果一定剂量的衣原体MoPn经鼻腔吸入可引起小鼠衣原体肺炎，以肺组织衣原体生长及肺组织大量中性粒细胞浸润为特征。结论小鼠可作为研究沙眼衣原体肺炎有价值的动物模型。　　【关键词】沙眼衣原体小鼠肺炎髓过氧化物酶Esta

2、blishmentanddetectiontoChlamydiatrachomatispneumonitisofthemouse　　【Abstract】ObjectiveToestablishamousemodelofChlamydiatrachomatispneumonitisandinvestigatethedetectivemethod.MethodsPneumonitiswasproducedbyintranasalinoculationofChlamydiatrachomatismousepneu-monitis（MoPn

3、）biovarinC57BL/6mice.ChlamydiagrowthinthelungsweredeterminedbychlamydiainfectivityandchlamydiamRNA6expressioninthelungs.Lunginflammatorycelltypewasdeterminedbylungmyeloperoxidaseassay.TheinfectionwasconfirmedbyinoculatingHela229cellmonolayerwithlunghomogenatesfollowedb

4、yHRPconjugateanti-ChlamydiaLPSmAb.ResultsIntranasallyinfectedwithC.trachomatisMoPninmiceresultedinChlamydiamousepneumonitisfeaturedbychlamydiagrowthandmassiveinfiltrationofneutrophilsinthelung.ConclusionMicemayserveasausefulanimalmodelforthestudyoftheChlamydiatrachomat

5、ispneumonitis.　　【Keywords】Chlamydiatrachomatismousepneumonitismyeloperoxidase　　沙眼衣原体小鼠肺炎菌株（MoPn）是小鼠肺炎的天然病原体，最初是从小鼠肺组织分离得到的，所以MoPn感染的小鼠模型最常用于研究衣原体体内感染。本研究以MoPn通过呼吸道感染易感小鼠，并通过检测衣原体在肺组织中的生长及肺组织炎症细胞的浸润，对小鼠衣原体肺炎进行检测和鉴定。　　1材料与方法　　1.1沙眼衣原体菌株6MoPn生长于HeLa229细胞，用不连续密度梯度离心法纯化衣原体，

6、进行活性测定后用于感染小鼠。　　1.2感染小鼠6～8周龄雌性C57BL/6小鼠（中国医学科学院血液病研究所提供），在微麻状态下鼻腔内吸入40μl含1×103包涵体形成单位（IFU）的MoPn。　　1.3肺组织上清液中衣原体活性测定无菌采集小鼠肺组织右叶，制备成组织匀浆，离心。用肺组织上清液滴定HeLa细胞单层。用连接有过氧化物酶的鼠抗衣原体脂多糖单抗（anti-LPSmAb）（Virostat）染色，以鉴定衣原体的感染性，感染强度以IFU表示［1］。　　1.4肺组织髓过氧化物酶（Myeloperoxidase，MPO）检测［2］制备

7、肺组织匀浆，沉淀物超声粉碎。上清液与25μlTMB底物液反应，以人髓过氧化物酶做标准品，在全自动酶标仪上读取650nmOD值。　　1.5MoPnmRNA的表达RT-PCR检测小鼠肺组织沙眼衣原体MoPnmRNA表达。　　2结果　　2.1MoPn感染后小鼠肺组织衣原体生长6见图1。图1显示，在感染后第2天，小鼠肺组织可检测到衣原体生长，IFU值增高。衣原体生长在感染后第7天达高峰，4只小鼠肺组织均检测到衣原体MoPnmRNA表达，见图2。　　图1衣原体感染C57BL/6小鼠肺组织衣原体活性略　　图2小鼠呼吸道沙眼衣原体感染后肺组织衣原

8、体MoPnmRNA表达略　　2.2中性粒细胞髓过氧化物酶（MPO）检测C57BL/6小鼠呼吸道感染衣原体MoPn后第2天，肺组织MPO活性明显增高（P<0.01），至第3天达高峰，以后逐渐下降，感染后21天恢复正常水平（图未显示