四株不同来源海洋微生物胞外多糖的结构及抗氧化活性研究

《四株不同来源海洋微生物胞外多糖的结构及抗氧化活性研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、中国海洋大学博士学位论文四株不同来源海洋微生物胞外多糖的结构及抗氧化活性研究姓名：陈荫申请学位级别：博士专业：药物化学指导教师：毛文君20120602四株不同来源海洋微生物胞外多糖的结构及抗氧化活·眭研究摘要微生物多糖由于其独特的理化性质和丰富的生物功能，培养条件可控等优势得到广泛的应用和规模化生产。海洋蕴含丰富的微生物资源，其种类多样，性质特异。从海洋微生物中寻找结构新颖，活性独特的胞外多糖具有重要理论意义和潜在的应用价值。本文以14种不同海洋来源微生物的发酵液为研究对象，从中提取胞外多糖，对其进行组成分析，从中

2、筛选出4株海洋微生物，包括南海红树林内生真菌似印P曙f盯“ssp．Y16)，南海珊瑚共附生真菌似胖厂gf，如’ve坶^∞如，．LCJ一5·4)，太平洋深海底质来源真菌(P阴fcf肼“m矿妇咖^W聊)以及南海海绵内生真菌以加朋口，．蛔Sp．SP32)，对其胞外多糖进行分离纯化、结构研究和抗氧化活性评价。研究结果如下：1．从南海红树林植物厚藤内生真菌么．罂圮馏f刀螂sp．Y16发酵液中提取得到胞外多糖，通过QSepharoseFaStFlow离子交换柱层析及SephadeXG150，Superdex75凝胶渗透柱层析对

3、其分离纯化，得到两个多糖组分Asl．1和As2．1，分子量分别为15kDa和6kDa，Asl．1是由M锄和Gal组成，比例为9：1；As2．1全部由M锄组成。经甲基化及1D，2DN№分析表明，Asl．1是以(1_2)．a-D．Ma印为主链的半乳甘露聚糖，其O一6约每3个糖基存在一个分支，支链由pM印、p．Gal厂和少量(1_6)．Q．D．Manp组成。As2．1是近似直链的(1_6)．c‘-D．Mallp连接的甘露聚糖，在O．3位存在一定的分支，分支由0L．D。Ma印及(1_3)．0L．D．Ma印组成。通过体外DP

4、PH自由基、羟基自由基、超氧阴离子自由基清除能力及抗脂质过氧化作用评价表明，Asl．1和As2．1具有良好的体外DPPH自由基和超氧阴离子自由基的清除能力，特别是Asl．1，其清除DPPH自由基的EC50值为1．45m∥mL。该研究首次从厚藤内生真菌彳印PrgfZ，淞sp．Y16胞外多糖中获得了结构新颖的以(1—2)-a—D-Ma叩为主链的具有抗氧化活性的半乳甘露聚糖，其具有潜在开发应用价值。2．从南海珊瑚共驸生真菌爿印P呼Z如w胚fcdDrLcJ．5．4发酵液中提取胞外多糖，通过QSepharoseFastFlo

5、w离子交换柱层析及SephacryalS400，Superdex75凝胶渗透柱层析对其分离纯化，得到两个多糖组分Av二l和AⅥk经GC、HPLC、}球GPC、IR、甲基化及lD，2DNMR分析表明，AV．1是以葡萄糖为主的中性杂多糖，分子量为500kDa，其结构以(1_6)．0【-D．Gl印为主要连接方式，平均9个糖基存在一个以单个非还原末端a．D．Ma印形式的分支连接在主链(1_6)．0L．D．Gl印的O．3位上。AVP是分子量为7kDa，结构新颖的甘露葡聚糖，其主链以(1—6)．Q．D．Gl印为主，还含有(1_

6、2)．Q-D．M锄p，也存在一定的分支，平均每8个糖基存在一个分支，而且支链比AV．1的支链要长，除了非还原末端a．D．Manp以外，还含有(1-÷2)吨．D．M锄p，连在主链(1—2)吨．D-Ma印的O．6位上。通过体外抗氧化指标评价表明，AⅥ，具有良好的清除自由基的能力，对DPPH自由基和超氧阴离子自由基的清除EC50值分别为2．0m∥mL和1．5mg／mL。本研究从珊瑚共附生真菌彳．w坶矗’D肠，．LCJ．5．4得到两种胞外多糖，AV．1为具有Man分支的类似右旋糖酐结构，AVP是结构新颖具有抗氧化活性的甘露

7、葡聚糖，表明海洋共附生真菌是结构新颖的活性胞外多糖的重要来源。3．从太平洋深海底质来源的真菌灰黄青霉尸P刀fcf肼姗，∥№咖知z，所发酵液中获得的胞外多糖，通过QSepharoseFastF10w阴离子交换柱层析及Superdex75凝胶渗透柱层析分离纯化得到多糖组分Psl．1。HPGPC及闭，LC研究表明，Psl一1是分子量为20kDa，Gal与M锄的比例约为1：1的半乳甘露聚糖。通过部分酸水解、甲基化、1D，2DNMR、乙酰解和ESIMS分析表明，Psl．1是以(1_÷6)．n．M锄矽为主链的磷酸化半乳甘露聚糖

8、。其存在Man核心，核心结构是以(1_6)．伐．Ma印为主链的多分支结构，分支发生在主链的O．2位上，由单个非还原末端的a．Manp及(1—2)．a．Ma印连接的二糖和三糖组成。由Gal组成的支链结构连接于M锄的核心结构上，Gal支链由p．(1_5)．Ga矿组成，存在15％的分支，分支由单个非还原末端的p—Ga圹连接在主链p-(1—5)一Ga矿的O．6上，并