人类胎儿睾丸组织异种移植模型的建立

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1、浙江大学硕士学位论文人类胎儿睾丸组织异种移植模型的建立姓名：田红娟申请学位级别：硕士专业：儿科学指导教师：唐达星20120222浙江大学硕士学位论文中文摘要人类胎儿睾丸组织异种移植模型的建立浙江大学医学院儿科学硕士研究生田红娟导师唐达星中文摘要目的：性别发育异常(DisordersofSexDeVelopme她DSD)是指染色体性别与性腺性别或包括内外生殖器在内的表型性别的不一致，其中，男性性别分化发育几乎完全依赖胚胎睾丸的激素分泌。睾丸源性生殖障碍综合征(TeSticul盯DysgenesisSyndrome，TDS)是包含儿童期隐睾、尿道下裂和成年期睾丸肿瘤、精子数量不足

2、等四种临床极为常见疾病在内的一种综合症。近几十年来DSD和TDs发病率在不断上升．目前观点认为这些异常源于胎儿时期睾丸受到环境内分泌干扰因子干扰致未正常分化发育，但绝大多数研究证据来源于动物实验．建立去势裸鼠为受体的异种人类睾丸组织移植模型，将为探索人类DSD和TDS的发病机制提供证据等级更高的研究载体。方法：切取10—13孕周非因疾病因素人工引产胎儿的性腺组织(n=12个)，剪成约l衄3组织块，移植入雄性去势裸鼠背部皮下，移植9周左右移植物回收，测量移植物大小重量。收集21孕周的人工引产胎儿睾丸组织作为同龄对照标本(n=1)．通过对照睾丸组织移植前后标本，及同龄对照标本的组

3、织细胞形态学改变和免疫组织化学表现，来观察人类早期胎儿睾丸组织在异种异位的生长发育情况．结果：移植时胎儿性腺组织标本大小约lmm3、重约5mg，移植后取出的移植物最大重量为84．1mg．12例未成熟性腺组织移植后观察到有ll例在受体中继续生长发育．其中7例为卵巢组织，4例为睾丸组织．共移植12个睾丸组织块，回收9II浙江大学硕I：学位论文中文摘要个组织块，胚胎睾丸移植物的回收率为9／12(75％)．光镜下移植物标本显示出正常的大体形态，可辨认出含有Sertoli细胞和生殖细胞的生精小管，由含有Leydig细胞的问质细胞包绕。小管中无规则分布的原始生殖细胞和原始Senoli细胞

4、开始向基底膜部位迁移，其中部分原始生殖细胞已定位于基底膜处，并具有精原细胞的特征；Sertoli细胞也由幼稚状态发育为具有丰富胞质的成熟型细胞，有序排列在精原细胞周围，椭圆形的细胞核较整齐地排列于近基底膜部位，核的长轴垂直于基底膜，其幕布样胞质将精原细胞包围，形成壁龛样结构。免疫组化显示，移植时标本中生精小管未完全形成，移植后生精小管形成并显示出正常的形态。移植时Senoli细胞(Vim染色显示)已经聚集，但未形成明显的生殖细胞索；许多生殖细胞(OCT4染色显示)开始聚集，多表达细胞全能性标志物OCT4；未检测到雄激素受体(AR)、抗苗勒管激素(AMH)，SMA表达。移植后，

5、生殖细胞位于生精小管内，一些生殖细胞停止表达OCT4，被Senoli细胞包绕，此时，生精小管外形成一层平滑肌样细胞，为管周肌样细胞(SMA染色显示)，此细胞在移植前对照标本中不存在，同时可测到AR、AMH表达，且与同龄对照标本相似．移植时、移植后及同龄对照表本表达细胞增殖标记物l【i．67，移植后标本Leydig细胞增殖较移植前标本活跃．结论：人类早期人工引产胎儿睾丸组织移植到免疫缺陷小鼠体内后，睾丸组织可继续正常生长发育，因此可作为研究人类性别分化发育和、DSD及TDS的发病机制的较好模型．关键词睾丸；异种移植；组织学；胎儿浙江大学硕士学位论文英文摘要MOdeling0fx

6、enograf．tinghumanf．etaltestisissueColIegeofMedicine，ZhejiangUniVersityPediatricsM．DCandidateTianHon舀uanSuperyisor1’angDaxingAbstractobjectiVe：DisordersofseXdeVelopment(DSDs)isinconsiStentofcluIomoSomal∞x，gonad甜sexorpheno哆pic∞xiIlcludingintemalandextemmgeIlitalhMaJesexdiffbrentiation锄ddevelo

7、pmentalmoStentirelydependemontlleho彻oneSecretionoftlleembr)，o证ctestis．TbSticul缸dysgenesissyIldrome(TDS)isextremelycommon、Ⅳhichincludes∞mecaSesofulldeScendedtesti蚰ypoSpadi嬲iIlchildhood锄dlowSpenllco岫tS／testiculargemcellturnourS(TGCTs)iIladulm00d．nleinciden