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《大鼠尿液中唑吡坦及其代谢物分析lcms-it-tof》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、大鼠尿液中哇毗坦及其代谢物分析LCMS-TT-TOF概述近年来，在法医毒物分析工作中涉及卩坐毗坦的案件成日益上升趋势，常见的案件如麻醉抢劫等。国内有较多关于人体内卩坐毗坦含量测定的报道，主要为药代动力学方面的研究，且多使用GCMS法和HPLC法，未见对畔毗坦代谢物使用LCMS进行系统分析的研究。使用LCMS-IT-TOF系统对卩坐毗坦进行多级质谱研究、总结其多级裂解规律，并在此研究基础上对哇毗坦在大鼠体内的代谢物进行分析鉴定。检材处理尿液处理:酸性提取取25n±大鼠尿液于锥形瓶中，用0.1mol/L盐酸调pH6,加入pH4.8醋酸钠
2、-醋酸缓冲液5mL,加入0.5mLB-葡萄糖醛酸酶溶液,57°C下酶解30min,离心(7000r/min,10min),上清液过Oasis?HLB3cc固相萃取小柱(固相柱使用前依次过甲醇3讥、超纯水3niL、pH4.8缓冲液3mL,进行活化)，用5%甲醇水溶液3mL清洗柱子，离心(5000r/min,5min),除去柱中水分，分别用5mL乙瞇、3mL氯仿:异丙醇(9:1,V/V)洗脱。碱性提取将酸性提取后的尿液用6mol/LNaOH将溶液调节到弱碱性，加pH9.2的Tris-HCl缓冲液10mL,过Oasis?HLB3cc固相萃
3、取小柱，分别用5rnL乙醯、3mL氯仿异丙醇(9:1)洗脱。合并洗脱液于具塞玻璃试管+,70°CF氮气吹干,残渣用100uL丙酮溶解。药品与试剂乙睛为色谱纯(美国Fisher公司)，甲酸钱为分析纯日本和光纯药公司，流动相用水由M订i-Q纯水系统美国Milipore公司制得。仪器及试剂LCMS-TT-TOF系统，包括LC-20ADX2输液泵，STI-20AC自动进样器,CT0-20AC柱温箱,SPD-M20A二极管阵列检测器,CBM-20A控制器,DGU-20A3在线脱气机，LCMS-IT-TOF电喷雾电离-离子阱-飞行时间串级质谱仪
4、。LCMSsolution3.5工作站，MetTDsolution代谢物鉴定软件。HPLC:色谱柱:Shim-PackVP-ODS150mmX2.0mm,5um流动相:A水+25nmol乙酸鞍B乙月青时间程序：表1梯度洗脱程序时间minA%B%0901020703030406030.1901045901045STOP流速：0.2mL/min进样量：1uLPDA检测波长：190-800nm柱温：30°C83MS:离子化模式:ESI源分析模式：正、负离子模式雾化气流速:1.50L/minCDL温度：200°C加热模块温度:200°C检测
5、器电压：1.70kv碰撞能量:20%-50%采集范围：m/z100-1000自动调谐优化质谱条件，外标法校正质量数结果与讨论对大鼠尿液进行LCMS-IT-TOF正、负离子模式分析。样品在正离子模式具有较好的质谱响应,各主要色谱峰均有良好的信号强度。因此，着重分析正离子模式检测结果，见图E图1正离子模式下的TIC图和MIC图在正离子模式对样品进行多级质谱分析，获得各个主要谱峰MS1-MS5的多级质谱数据，表2对8个谱峰的多级质谱数据进行总结，根据哇毗坦对照品的保留时间,确定峰8为卩坐毗坦,为大鼠尿液中的原药成分。15表28个谱峰MS-
6、MS的主要多级质谱碎片RTMSfragments#12345minMSMSMSMSMS110.2338.1500293.0909249.1010234.0781205.0754214.9338.1497293.0921249.1039234.0805219.0892234.1152219.0909217.1831190.0649315.0310.1549279.1120249.1010248.0945219.092041&3310.1540251.1170236.0942205.0733151.0545279.1120264.087
7、2235.0862-518.5324.1692279.1117249.1011234.0811205.0760621.0324.1696279.1122264.0862235.0866724.6294.1596263.1173234.1126220.1018-219.0922827.7308.1760263.1162248.0942151.0553205.0741由于大鼠尿液成分复杂，图1显示的总离子流图屮有较多的谱峰，手动分析醴毗坦的代谢物难度较大且需要较长的解析时间。代谢物软件MetIDsolution是针对药物代谢物自动分析而
8、专门开发的软件。由于代谢物与原药相比具有结构上的类似性，从而产生相似的多级质谱84碎片。因此,MetIDsolution可自动进行原药与不同化合物之间多级质谱数据的比对，根据其多级碎片的相关性，确认与原药结构相似的物质。本文即采用Me
