唑吡坦对大鼠下丘脑内睡眠相关基因表达的影响

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1、唑吡坦对大鼠下丘脑内睡眠相关基因表达的影响作者：牟丽曾丽玲张小虎黄民赵华【摘要】目的研究催眠药唑吡坦对下丘脑内一些睡眠相关基因表达的影响。方法大鼠随机分为唑吡坦组和对照组(生理盐水灌胃)。采用RTPCR方法检测下丘脑内GABAA受体α1和α2、褪黑素1a受体、hypocretin及hypocretin受体2的mRNA表达水平。结果与对照组相比，唑吡坦降低下丘脑内hypocretin及褪黑素1a受体表达(P<0.05)，增加hypocretin受体2表达(P<0.05)，但对GABAA受体α1和α2表达则无明显影响(P>

2、0.05)。结论唑吡坦在下丘脑可能是通过褪黑素和hypocretin途径发挥其催眠作用，而不是通过GABA途径。【关键词】GABA;Hypocretin;催眠药;下丘脑;褪黑素　　【Abstract】ObjectiveTostudytheeffectofhypnoticzolpidemonthemRNAexpressionofsomesleeprelatedgenesinthehypothalamus.MethodsRatsorsaline(vehicle)intothestomachandthenlyintozolpidemandve

3、hiclegroups.ThemRNAlevelsofGABAAreceptorα1andα2，melatonin1areceptor，hypocretinandhypocretinreceptor2inthehypothalamusinedbyRTPCR.Resultsparedtothevehiclegroup，theexpressionofhypocretinandmelatonin1areceptortreatedgroup(P<0.05forall).Ho(P>0.05).ConclusionsThehypnot

4、iceffectofzolpideminthehypothalamusmaybeperformedbythepathelatoninandhypocretin，notbyGABAintheprocess.　　【Keyus;Melatonin　唑吡坦是非苯二氮卓类催眠药物，现今广泛被用于治疗暂时性及慢性失眠〔1〕。以往有研究表明唑吡坦在黑质和外侧隔核主要通过调节GABA并作用于GABAA受体α亚基的途径而发挥其催眠作用〔2〕。下丘脑也是体内重要的参与睡眠调节的脑区〔3〕。但是唑吡坦在下丘脑内是否也存在相似的机制却少有报道。褪黑素受体、hyp

5、ocretin及其受体含量在下丘脑内极其丰富〔4〕。特别是近年来，关于唑吡坦与褪黑素联合应用共同参与睡眠的治疗〔5〕的报道也被一些学者提出。因此，本实验应用RTPCR的方法观察了口服给予唑吡坦对下丘脑内的GABAA受体α亚基表达的影响，同时也检测了该区褪黑素受体1a、hypocretin及hypocretin受体2表达的情况，为进一步揭示唑吡坦在脑内的催眠机制提供新的依据。　　1材料与方法　　1.1动物及分组雄性.6:30光照开始)，室温为22℃±2℃。15只大鼠(重约450～550g)随机分为唑吡坦组(n=8)和对照组(n=7)。晨起

6、6:00灌胃给予唑吡坦(5mg/kg)或生理盐水。　　1.2实验试剂Trizol试剂和所有引物(Invitrogen);10×PCR缓冲液、TaqDNA聚合酶和dNTP(Amersham);MMLD逆转录酶和100bpDNA标记(Promega);琼脂糖(USB)。　　1.3标本采集给予唑吡坦后，当其在体内作用到达最大药效时，将大鼠置于密闭容器内通以CO2麻醉处死，迅速分离出下丘脑，投入液氮。后转入-80℃冰箱保存待RNA提取。　　1.4RTPCR采用Trizol法提取总RNA。经分光光度计测定RNA纯度良好后，RNA在MMLD逆转录酶

7、作用下合成cDNA。再以cDNA作为模板参与完成PCR反应。PCR扩增的条件为：94℃预变性10min;94℃变性30s;退火30s;72℃延伸30s;扩增数个循环后72℃延伸10min。PCR引物的设计依据GenBank中大鼠的相应序列。GABAAα1受体：正向：5′TGGGAGAGCGTGTAACTG3′，反向：5′TCCCTTGTCCACTCATAG3′，56℃29个循环，421bp。GABAAα2受体：正向：5′GTGGCAGTAGGAATGAAC3′，反向：5′CTGGGATAAGAACCTGTG3′，55℃29

8、个循环，515bp。褪黑素1a受体：正向：5′CTCGTGGTGGCTATTTAC3′，反向：5′AGTTTGGGTTTGCTGTCC3′，56℃29个循环，467bp。Hypocre