硫化氢对大鼠局灶性脑缺血损伤的影响及其机制研究

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1、河北医科大学博士学位论文硫化氢对大鼠局灶性脑缺血损伤的影响及其机制研究姓名：李国风申请学位级别：博士专业：药理学指导教师：张建新201204中文摘要硫化氢对大鼠局灶性脑缺血损伤的影响及其机制研究摘要中风是导致残疾的重要原因之一，其损伤的相关危险因素主要包括：兴奋性损害、Ca2+超载、自由基及脂质过氧化、线粒体功能障碍、一氧化氮(nitricoxide，NO)、细胞凋亡、细胞因子等。目前，溶栓仍为临床治疗脑缺血的主要手段，但一部分病人在溶栓治疗后由于再灌注等原因导致病情加重。因此，有关脑缺血损伤的发病机制、预防措施及治疗手段成为当今医学研究的热点之一。大脑中

2、动脉闭塞(MCAO)模型因其手术方法简单、动物损伤较小、成功率高而作为局灶性脑缺血损伤模型广泛应用于脑缺血损伤机制的研究。越来越多的证据表明硫化氢(hydrogensulfide，H2S)广泛参与机体多种病理生理过程。H2S已经被认为是继No和一氧化碳(carbonmonoxide，CO)之后的第三种气体信号分子。研究表明，H2S可通过抗凋亡和抗氧化应激而改善肝缺血再灌注损伤和心肌缺血再灌注损伤。H2S对脑缺血损伤的影响报道较少，其机制尚不清楚。本研究采用线栓法复制大鼠局灶性脑缺血损伤模型，观察H2S对局灶性脑缺血损伤的影响，并从氧化应激、凋亡和炎症细胞因

3、子方面探讨H2S可能的作用机制。第一部分硫化氢对大鼠局灶性脑缺血损伤的影响目的：观察硫化氢(H2S)对局灶性脑缺血损伤大鼠脑组织硫化氢／3．巯基丙酮酸转硫酶(H2S／3MST)及脑缺血体积的影响。方法：健康成年雄性SD大鼠(250．280蓟共80只，随机分为5组，每组16只，分别为假手术组；缺血模型组；NariS低剂量组；NariS中剂量组；NariS高剂量组。NariS低、中、高剂量组分别于大鼠脑缺血3h时腹腔注射0．7mg／kg、1．4mg／kg和2．8mg／kg的NariS，假手术组和缺血模型组大鼠注射等容量的生理盐水。各组大鼠均于缺血24h断头取脑

4、，TTC染色测定脑梗死灶体积，测定脑组织中H2S含量，改良法测定脑组织3MST的活性。结果：与假手术组比较，缺血模型组大鼠脑梗死体积明显增大(氏0．01)，中文摘要脑组织中H2S含量、3MST活性明显降低(尸

5、2S对局灶性脑缺血损伤大鼠脑组织氧化应激的影响，并探讨其作用机制。方法：健康成年雄性SD大鼠(250．280曲共40只，随机分为5组，每组8只，分别为假手术组；缺血模型组；NariS低剂量组；NariS中剂量组；NariS高剂量组。10％的水合氯醛350mg／kg麻醉大鼠，采用线栓法复制大鼠大脑中动脉闭塞模型，假手术组颈部切开，分离颈总动脉、颈内动脉和颈外动脉但不插线栓。NariS低、中、高剂量组分别于大鼠脑缺血3h时腹腔注射0．7mg／kg、1．4mg／kg和2．8mg／kg的NariS，假手术组和缺血模型组注射等容量的生理盐水。各组大鼠均于缺血24h时

6、断头取脑，采用硫代巴比妥酸法测定脑组织中丙二醛(MDA)I拘含量、黄嘌呤氧化酶化学法测定脑组织中超氧化物歧化酶(SOD)的活性以及酶促反应谷胱甘肽消耗法测定脑组织中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)的活性；透射电镜观察脑组织的病理变化。结果：1与假手术组比较，缺血模型组大鼠脑组织中SOD、GSH．PX活性明显降低(P

7、鼠脑组织神经细胞核膜清晰、完整，核大而圆，微管、粗面内质网、高尔基复合体等细胞器清晰可见，线粒体内膜、外膜结构清晰，嵴排列整齐；缺血模型组大鼠可见明显神经元水肿，线粒体膜明显肿胀、线粒体嵴断裂甚至消失，线粒体大量空泡化，细胞器的数量减少等；与缺血模型组比较，NariS中、高剂量组大鼠可见神经元轻度水肿，线粒体部分肿胀、内外膜结构清晰、部分嵴断裂消失，细胞器中文摘要数量增多，脑缺血损伤程度明显减轻。结论：局灶性脑缺血损伤后氧化应激状态发生改变，脑组织脂质过氧化物MDA生成增多，抗过氧化物酶SOD和GSH-PX活性减弱；应用Naris后，脑组织脂质过氧化物MD

8、A生成减少，抗过氧化物酶SOD和GSH-PX活性增强，脑组织损伤明