增龄对大鼠局灶性脑缺血-再灌注损伤的影响

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1、增龄对大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤的影响作者：杜斌邱丽颖李英范红斌程建青【摘要】目的观察增龄对大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤(CI/RI)的影响。方法应用线栓的方法，对10、16周龄的雄性SD大鼠作局部脑缺血2h、再灌24h模型,观察增龄对大鼠神经症状缺失评分、脑损伤面积、病理形态、脑组织乳酸(LD)、乳酸脱氢酶(LDH)及血清中LDH和肌酸激酶(CK)的影响。结果CI/RI24h,两个年龄组神经症状缺失评分及脑损伤面积明显增大，病理形态改变严重、脑组织LD及LDH明显下降，血清中LDH和CK明显升高，以16周龄更为严重。结论CI

2、/RI随年龄增长损伤程度增加，可能与脑的老龄化相关。【关键词】增龄;脑缺血/再灌注损伤;大鼠脑缺血/再灌注损伤(CI/RI)导致的急性脑损伤，严重影响患者的预后和功能恢复。对于这个复杂多环节病理过程，其病情的发展和转归尚不明确。本文旨在通过研究不同年龄组大鼠局灶性CI/RI时脑损伤的改变，了解年龄对CI/RI的影响。　　1材料与方法　　1.1药品和试剂氯化三苯基四氮唑(TTC)(上海化学试剂公司),磷酸盐缓冲液配制,避光低温贮存;生化试剂盒(购自南京建成生物工程研究所);其余试剂均为国产分析纯。　　1.2实验动物与分组雄性SD大

3、鼠，由中国科学院上海实验动物中心提供，动物编号为SCXK(沪)20070005。其中10周龄大鼠体重(190±20)g;16周龄大鼠体重(260±20)g。不同年龄组大鼠分别分为假手术组、CI/RI模型组。术前12h禁食,自由饮水。　　1.3模型制备用直径0.205mm尼龙线作栓子,参照Longa等〔1〕腔内线栓法制作右侧大脑中动脉栓塞(MCAO)模型。局部脑缺血2h、拔出线栓行再灌24h。　　1.4神经症状缺失评分按5分制评分标准，术后评1～3分者为手术成功标志;0分：无明显神经病学症状;1分：不能完全伸展左前肢;2分：向左

4、侧旋转;3分行走时向左侧倾斜;4分：不能自行行走。　　1.5脑损伤范围测定再灌24h时迅速断头取脑，4刀5分法沿冠状切面切片，2%TTC染色后，正常组织呈红色，损伤组织呈白色。CAD计算机软件计算损伤面积，以占双侧大脑半球面积的百分比作为损伤面积〔2〕。　　1.6病理形态改变取视交叉至漏斗柄的脑冠状切片，置10%福尔马林中固定，常规脱水、透明、浸蜡、包埋等步骤，5μm脑组织冠状切片作HE染色，观察脑形态学变化。　　1.7脑组织LD、LDH的活性测定取脑组织与生理盐水制成10%组织匀奖，3500r/min离心10min。取上清于-

5、20℃保存备用。LD及LDH的测定严格按试剂盒说明进行。　　1.8血清LDH、CK的活性测定再灌24h时迅速断头取血，分离血清样本,LDH、CK的测定严格按试剂盒说明进行。　　1.9统计学处理实验数据以x±s表示,组间差异用t检验。　　2结果　　2.1各组大鼠神经症状缺失评分与假手术组比较，10周龄CI/RI组与16周龄CI/RI组的大鼠均表现不同程度的神经症状缺失(P<0.01)。与10周龄CI/RI组比较，16周龄CI/RI组神经症状缺失明显严重(P<0.01)，见表1。表1CI/RI时神经症状缺失评分、脑损伤面

6、积的变化1)与同周龄假手术组比较，2)与10周龄CI/RI组比较：P<0.01，下表同　　2.2各组大鼠脑损伤范围变化与10周龄CI/RI组比较，16周龄CI/RI组脑损伤面积扩大(P<0.01)，(见表1，图1)。　　2.3各组大鼠病理形态学的改变假手术组，皮层神经细胞排列整齐，分布均匀，层次清楚，大小一致，胞膜完整，胞浆均匀，核膜清楚，染色质颗粒细小均匀，有一小核仁。10周龄CI/RI组，大脑皮质部分细胞消失，数目减少，排列紊乱，星形胶质细胞增生，胞核深染，形态大小不一，血管周围出现空晕，间质疏松。16周龄CI/

7、RI组，大脑皮质部分细胞消失，数目减少，排列紊乱，细胞体积大小不一，形态不规则，有呈三角形、菱形和不规则形，胞核深染，大小形态不一，核膜不清，核仁不明显。中心区域出现坏死;星形胶质细胞增生，胶质结节形成，血管扩张充血，其周围出现空晕，间质疏松，呈网状改变等。见图2。　　2.4各组大鼠脑组织LD、LDH含量变化与同周龄假手术组比较，10周龄CI/RI组LD、LDH水平显著降低(P<0.01)，16周龄CI/RI组LD、LDH水平显著低于10周龄CI/RI组(P<0.01)(表2)。　　2.5各组大鼠血清CK、LDH含量

8、的变化与同周龄假手术组比较，CI/RI组CK、LDH含量显著升高(P<0.01)。16周龄CI/RI组血清中的CK、LDH含量明显高于10周龄CI/RI组(P<0.01)(表3)。表2CIRI时大鼠脑组织中LD、LDH的变化表3CIRI时大鼠血清中C