麦芽醇对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的影响

《麦芽醇对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的影响》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、麦芽醇对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的影响【关键词】麦芽醇；脑缺血再灌注；一氧化氮合酶ABSTRACT:ObjectiveToinvestigatetheeffectofmaltolontheexpressionofnNOSafterfocalcerebralischemia/reperfusioninrats.MethodsThemodelofischemia/reperfusioninjuryporarymiddlecerebralarteryocclusion(MCAO).TheexpressionofnNOSmunohistochemistry.Resu

2、ltsTheexpressionofnNOSia/reperfusion.ApplicationofmaltolcouldinhibittheexpressionofnNOS.ConclusionMaltolhasaprotectetiveeffectoncerebralischemia/reperfusioninjurybyreducingtheexpressionofnNOS.KEYaltol;Cerebralischemiareperfusion;NOS目前已经确定的一氧化氮合酶的亚型有3种，分别称为神经元型NOS(neuronalNOS,nNOS),诱

3、导型NOS(inducibleNOS,iNOS)和内皮型NOS(endotheialNOS,eNOS)。脑缺血再灌注损伤后NOS活性明显增加，加重局灶性脑缺血损伤[1]。麦芽醇是从红参中提取的单体化合物，其在体内外可与自由基结合，对脑缺血再灌注损伤有保护作用[2,3]。为了深入研究麦芽醇抗脑缺血的机制，本文观察了麦芽醇对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后神经元型NOS的影响。1材料与方法1.1试验动物和分组成年健康雄性SD大鼠36只，体质量230～280g，清洁级，咸宁学院医学院试验动物中心提供。随机分为对照组、缺血再灌注组和麦芽醇组，每组12只。1.2大脑中动脉闭

4、塞（MCAO）再灌注模型的建立参照Koizumi等[4]方法制作大鼠左侧大脑中动脉阻塞及再灌流模型。采用10％水合氯醛（0.3ml/100g）麻醉,术中维持动物肛温(36.6±0.5)℃，颈部正中切口，分离并结扎左侧颈总动脉、颈外动脉,注意避免刺激迷走神经。从颈总动脉分叉处插入4.0丝线,沿颈内动脉进入距颈总动脉分叉处1.8～2.0cm略感阻力时停止；30min后拔出丝线进行缺血再灌流。术后在约20℃的空调环境下单笼饲养,自由进食、进水。对照组只暴露血管。1.3给药方法参考有关文献[4]麦芽醇组分别在缺血前和缺血后30min经尾静脉注射2ml700μmol/L

5、麦芽醇生理盐水。1.4免疫组化检测nNOS的表达大鼠在脑缺血30min再灌注24h后经水合氯醛腹腔麻醉，开胸经主动脉插管，剪开右心房，以200ml生理盐水经升主动脉快速冲洗。随后灌注冷的(4℃)4%多聚甲醛固定液350ml，开颅取出全脑，修块保留缺血中心区(前囟后1.8mm)后固定于相同固定液中6h，入25%蔗糖至组织块下沉。AO恒冷箱切片机连续冠状切片，片厚20μm。对脑组织冰冻切片进行nNOS表达的检测，蒸馏水新鲜配置3%H2O2，室温浸泡5～10min以灭活内源性酶，滴加正常山羊血清30min，不洗，甩去多余液体；滴加兔抗鼠nNOS一抗(1∶400，北京

6、中杉金桥生物技术有限公司)，室温下(25℃)孵育2h，然后在4℃下过夜，PBS洗；滴加生物素化山羊抗兔IgG(北京中杉金桥生物技术有限公司二抗试剂盒)，室温下30min，PBS洗；滴加辣根酶标记的链酶卵白素稀释液,室温孵育45min，PBS洗10min×3次；DAB显色，室温下15min，双蒸水多次洗涤；脱水、透明，中性树胶封片。显微镜下观察，阳性细胞呈棕黄色颗粒。2结果nNOS免疫反应反应产物为棕褐色颗粒或点状，分布于胞浆。缺血再灌注组nNOS在皮层大量表达，与正常对照组相比染色明显加深。麦芽醇组nNOS在皮层阳性表达与缺血再灌注组比较染色明显减弱（图1）。

7、对各组大鼠皮层经HPIAS100高清晰度彩色病理图文分析系统测定其吸光度，并经包于该系统内的统计软件处理（方差分析），定量分析结果显示缺血再灌注组nNOS在皮层的吸光度（9.25±0.22）较正常对照组（7.66±0.32）相同脑区显著上升(P<0.05)；麦芽醇组在皮层吸光度（7.66±0.32）较缺血再灌注组显著降低(P<0.05)。3讨论NO是一种自由性质的气体，为较小的生物活性分子，可自由穿过细胞膜，作用于细胞内的靶分子。机体内NO过量的生成可直接抑制有关酶的活性,可与超氧化物歧化物结合导致细胞的损伤[5,6]。有研究表明NO在脑缺血性损

8、伤的发病中起重要作用，缺血后数分钟NO