麦芽醇对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后inos的影响

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1、麦芽醇对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后iNOS的影响　　ABSTRACT：ObjectiveToinvestigatetheeffectsofmaltolontheexpressionofiNOSafterfocalcerebralischemiareperfusioninjuryinrats.MethodsThemodelofischemiareperfusioninjuryiddlecerebralarteryocclusion(MCAO).TheexpressionofiNOSmunohistochemistry.ResultsTheex

2、pressionofiNOSiareperfusion.TreatmentaltolcouldmarkedlyinhibittheexpressionofiNOS.ConclusionmaltolmayprotectcerebralischemiareperfusioninjurybyreducingtheexpressionofiNOS.　　KEYaltol;Cerebralischemia;Reperfusioninjury;Induciblenitricoxidesynthase　　目前已经确定的一氧化氮合酶亚型有3种，分别称为神经元型

3、NOS(neuronalNOS,nNOS)、诱导型NOS(inducibleNOS,iNOS)和内皮型NOS(endotheialNOS,eNOS)。脑缺血再灌注损伤后NOS活性明显增加，加重局灶性脑缺血损伤[1]。麦芽醇是从红参中提取的单体化合物，其在体内外可与自由基结合，对脑缺血再灌注损伤有保护作用[2，3]。为了深入研究麦芽醇抗脑缺血的机制，我们观察了麦芽醇对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后iNOS的影响。　　1材料与方法　　1.1试验动物和分组　　成年健康雄性SD大鼠36只，体质量230～280g，清洁级，武汉大学基础医学院试验动物中心提

4、供。随机分为对照组、缺血再灌注组和麦芽醇组，每组12只。　　1.2大脑中动脉闭塞(MCAO)再灌注模型的建立　　参照Koizumi等[4]方法制作大鼠左侧大脑中动脉阻塞及再灌流模型。采用10%水合氯醛(0.3ml/100g)麻醉,术中维持动物肛温(36.6±0.5)℃，颈部正中切口，分离并结扎左侧颈总动脉、颈外动脉,注意避免刺激迷走神经。从颈总动脉分叉处插入4.0丝线,沿颈内动脉进入距颈总动脉分叉处1.8～2.0cm略感阻力时停止;30min后拔出丝线进行缺血再灌注。术后在约20℃的空调环境下单笼饲养,自由进食、进水。对照组只暴露血管。　　1

5、.3麦芽醇给药　　参考有关文献[5]，麦芽醇组分别在缺血前和缺血后30min经尾静脉注射2ml700μmol/L麦芽醇生理盐水。　　1.4免疫组化检测iNOS的表达　　大鼠在脑缺血30min再灌注24h后经水合氯醛腹腔麻醉，开胸经主动脉插管，剪开右心房，以200ml生理盐水经升主动脉快速冲洗。随后灌注冷的(4℃)4%多聚甲醛固定液350ml，开颅取出全脑，修块保留缺血中心区(前囟后1.8mm)后固定于相同固定液中6h，入25%蔗糖至组织块下沉。AO恒冷箱切片机连续冠状切片，片厚20μm。对脑组织冰冻切片进行iNOS表达的检测，蒸馏水新鲜配置3

6、%H2O2，室温浸泡5～10min以灭活内源性酶，滴加正常山羊血清30min，不洗，甩去多余液体;滴加兔抗鼠iNOS一抗(1∶400，北京中杉金桥生物技术有限公司)，室温下(25℃)孵育2h，然后在4℃下过夜，PBS洗;滴加生物素化山羊抗兔IgG(北京中杉金桥生物技术有限公司,二抗试剂盒)室温下30min，PBS洗;滴加辣根酶标记的链酶卵白素稀释液,室温孵育45min，PBS洗10min×3次;DAB显色，室温下15min，双蒸水多次洗涤;脱水、透明，中性树胶封片。显微镜下观察，阳性细胞呈棕黄色颗粒。　　对各组大鼠皮层经HPIAS100高清

7、晰度彩色病理图文分析系统测定其吸光度，并经包于该系统内的统计学软件处理(方差分析)，定量分析结果显示：缺血再灌注组iNOS在皮层和海马的吸光度较正常对照组相同脑区显著上升(P<0.05);麦芽醇组在皮层和海马吸光度较缺血再灌注组显著降低(P<0.05)。(表1)　　3讨论　　NO是一种自由性质的气体，为较小的生物活性分子，可自由穿过细胞膜，作用于细胞内的靶分子。机体内NO过量的生成可直接抑制有关酶的活性,可与超氧化物歧化物结合导致细胞的损伤[6，7]。有研究表明NO在脑缺血性损伤发病中起重要作用，缺血后数分钟NO含量明显增高，之后

8、缓慢下降，于再灌注期NO再次升高[5]。NOS是NO合成中的关健调节因素，体内NO的含量及生物学作用完全依赖于NOS的活性。NOS活性的升高伴随着NO含量的增加。在