姜黄素对肾小管上皮细胞转分化的干预作用以及与pparγ有关的信号通路的研究

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1、橇旦大学万方数据硕士学位论文姜黄素对肾小管上皮细胞转分化的干预作用以及与PPARY有关的信号通路的研究院专姓系：业：名：指导教师：导师小组成员：药学院药理学李睿张雪梅副研究员力宏副教授谭文福副教授辛宏讲师完成日期：2012年5月本课题由上海市溶菌酶．姜黄素．纳米微粒靶向治疗大鼠。肾间质纤维化的实验研究(上海市科委自然科学基金)资助编号：11ZRl433200起止日期：2011．1-2014．1万方数据复旦大学硕士学位论文缩略词表缩略词表幽幽舢删删删．1舢1111删IIIIII舢IIII舢11Y27009

2、08。英文缩写英文全称中文全称cc．SMA0【．smoothmuscleactin0【．平滑肌肌动蛋白万方数据复旦大学硕士学位论文中文摘要摘要【目的】肾小管间质纤维化(Tubulointestitialfibrosis，TIF)是各种不同慢性。肾病进行性发展的共同通路，目前尚无特效治疗。目前公认的引起TIF的主要机制之一是肾小管上皮细胞转分化(Epithelialmesenchymaltransition，EMT)。姜黄素是中药姜黄中的主要活性成份，具有抗纤维化的能力，但其抗TIF的作用尚待深入研究，目

3、前关于姜黄素发挥作用的机制仅初步研究了经典的TGF．13／Smads通路，其它机制研究较少。MAPK通路是非Smad通路中重要的通路，其中ERKl／2通路在EMT中发挥着重要的作用，但其具体机制尚未清楚。另外有报道姜黄素可以激动PPAR7受体，而PPAR?激动剂如吡格列酮具有抑制纤维化的作用。因此我们假设姜黄素通过与PPARY相关信号转导途径抗TIF。并探索姜黄素抑制HK-2细胞发生EMT与ERKl／2通路和PPARY通路有关的机理。【方法】整体实验我们采用结扎C57BL小鼠右侧输尿管建立UUO模型，将

4、小鼠随机分为假手术组、模型组、不同剂量姜黄素组和姜黄素+PPARY抑制剂组。术后第lO天和14天通过HE染色和Masson染色观察肾脏病理情况。体外实验采用TGF．131刺激HK-2细胞，使其发生EMT，采用westernblot和免疫荧光检测0【．SMA验证模型是否成功；姜黄素干预细胞36小时后采用westemblot检测u．SMA、E．cadherin和PAl．1确定姜黄素对EMT的作用；westernblot检测姜黄素对TGF．pII型受体(TRl3II)、TGF．DI型受体TRl3I、P．Sma

5、d2、P．Smad3、ERKl／2和P．PPARY的作用，免疫荧光检测姜黄素对PPA脚核转移的影响，探索姜黄素发挥抑制EMT的可能机制。另一方面，通过加入ERKl／2抑制剂U0126，PPAR7抑制剂BADGE以及shRNA沉默PPARY的表达进一步确定姜黄素发挥作用的机制。【结果】姜黄素可以改善UUO模型小鼠肾小管间质纤维化程度，加入了PPARY抑制剂后，姜黄素发挥上述作用的效果降低。2．5ng／ml的TGF．131可以诱导HK．2细胞发生EMT；姜黄素可以抑制TGF．131诱导的a．SMA和PAI．

6、1的表达，增加E。cadherin的表达；姜黄素可以抑制TRl3II、TRl3I、ERKl／2和P．PPAR7的表达，促进PPAR7核转移；U0126抑制ERKl／2，BADGE可以减弱姜黄素发挥上述作用，shRNA抑制PPARY的表达可以减弱姜黄素发挥抑制PAl．1和TRl3I的作用。U0126可以抑制TGF．131引起的PPAR7的磷酸化，但是通过BADGE抑制PPAR7的表达并不影响TGF．131引起的ERKl／2的磷酸化。【结论】姜黄素可以降低UUO模型中肾小管间质纤维化的程度，其机制可能通过与

7、PPARY有关的通路发挥作用。姜黄素可以抑制TGF．Bl诱导的HK．2细胞发生EMT，其机制是通过抑制ERKI／2通路并进而抑制PPARY通路发挥作万方数据复旦大学硕士学位论文中文摘要用的。【关键词】TGF一131；。g-间质纤维化；EMT；ERKl／2；PPA脚【中图分类号】R966【项目基金】本课题由上海市由溶菌酶．姜黄素．纳米微粒靶向治疗大鼠肾间质纤维化的实验研究(上海市科委自然科学基金)编号：11ZRl433200，起止日期：2011．1-2014．12万方数据复旦大学硕士学位论文英文摘要Abs

8、tractBackgroundandpurpose：Tubulointerstitialfibrosis(TIF)isthefinalcommonpathwayinlate—stagerenaldisease．Epithelial—to-mesenchymal(EMT)isconsideredasthemajorcontributortotheTIFbyincreasingthenumberofmyofibroblasts．Curcumin