葛根素丙二醇脂质体的构建及靶向性研究

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1、温州医学院硕士学位论文葛根素丙二醇脂质体的构建及靶向性研究姓名：张露申请学位级别：硕士专业：中药学指导教师：李校堃；赵应征2012-05-22温州医学院硕士学位论文葛根素丙二醇脂质体的构建及靶向性研究中文摘要中文捅要研究目的脂质体是一种药物新剂型，作为药物载体具有靶向性，缓释性，降低药物毒性，提高药物稳定性等优势。葛根素是豆科植物葛根中提取的一种化学物质，它具有保护心、肝、肾等方面的药理作用。本实验构建了一种新型的纳米柔性脂质体——丙二醇脂质体，以葛根素为模型药物，系统研究葛根素丙二醇脂质体的处方

2、工艺，质量评价，细胞毒性，药动学性质及对小鼠酒精性肝病的预防作用。研究方法(1)采用紫外可见全波长扫描测定葛根素和空白丙二醇脂质体的最大吸收峰，确定检测波长，采用高效液相色谱法(HPLC)测定葛根素及其制剂中的含量，建立标准曲线，采用凝胶过滤法测定葛根素丙二醇脂质体的包封率，并考察方法的回收率。(2)根据葛根素的物理性质，采用注入法结合pH梯度载药法制备葛根素丙二醇脂质体；以药物包封率、粒径分布或稳定性为指标考察磷脂浓度、胆固醇与磷脂比、药脂比等条件的影响；以包封率为指标，通过正交实验法优选出制备

3、葛根素丙二醇脂质体的最佳工艺处方。(3)以优选出的最佳工艺处方制备三批葛根素丙二醇脂质体，HPLC法测定包封率和载药量，透射电镜观察微观形态，激光粒度分析仪和zeta电位测定仪观察粒径分布和电位，过膜法测定弹力，不同温度和光照条件下考察制剂稳定性，浆法考察体外释放规律。(4)采用MTT法考察不同浓度丙二醇脂质体对肝癌细胞的安全性；在MTT实验基础上，考察不同载体浓度对细胞摄取行为的影响。(5)比较葛根素丙二醇脂质体和葛根素溶液剂腹腔注射给药在小鼠体内的药动学和组织分布特征，采用高效液相色谱法测定小

4、鼠血液和组织中葛根素浓度；DAS软件分析葛根素丙二醇脂质体和葛根素溶液剂药动学参数，比较二者在小鼠体内的组织靶向性。(6)采用酒精灌胃+高脂饲料+静脉注射LPS构建了酒精性肝损伤的小鼠模型，以门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸转移酶(ALT)、总胆固醇(TC)、甘温州医学院硕士学位论文油三酷(TG)、及肝脏组织病理检测等为主要评价指标，同时以动物体重、肝重和肝体比等为辅助指标对葛根素预防小鼠酒精性肝损伤进行药效学评价。研究结果(1)根据紫外扫描结果以230nm为葛根素紫外检测波长，HPLC法测定

5、脂质体中葛根素的包封率和载药量，在5．0～100．0lag／mL的浓度范围内，浓度与峰面积呈良好的线性关系。回归方程为A=62．882C一25．04，R2=l，方法精密度<3％，高中低三个浓度的回收率分别为98．2％，102％，97．4％，符合方法学要求，表明分析方法灵敏度高，专属性强。(2)注入法结合pH梯度载药法制备葛根素丙二醇脂质体。单因素考察结果为：磷脂浓度>15mg／mL，药脂比>1：10时，醇相PH>8．5时，对包封率影响不大：磷脂与胆固醇的比例，挤出操作对脂质体包封率几乎没有影响：载

6、药温度对包封率影响较大，45。C包封率最高；醇水体积比对脂质体包封率影响不大，但是对脂质体粒径有较大的影响；稳定剂种类对脂质体热力学稳定性有较大影响，加入羟乙基淀粉130／0．4氯化钠水溶液，脂质体粒子分散性较好，几乎不存在聚集状态。正交优化实验结果：磷脂浓度为20mg／mL磷脂与胆固醇比为2：1，药脂比为1：15，载药温度为45℃。(3)最佳优化工艺制备的葛根素丙二醇脂质体，粒径范围在50nm～300nm，平均粒径为185rim，分散均匀，zeta电位平均值为．13mV，弹性平均值48．6，平均

7、包封率和载药量分别为92．5％，11．4％；体外释放结果显示，在PBS缓冲液释放介质中，24h累积释放药物<50％，相对于游离的葛根素溶液，葛根素丙二醇脂质体具有一定的缓释作用。稳定性考察结果显示保存温度和光照对丙二醇脂质体影响较大，保存时选择常温(24℃)或低温(4℃)避光保存。(4)MTT结果显示丙二醇脂质体对细胞的毒性存在着剂量依赖性，高浓度时(>50％，V，V)毒性较大；细胞对药物摄取能力也存在着显著的剂量依赖性，随着体系中载体浓度的升高，细胞摄取能力显著增强。(5)药动学数据显示葛根素丙

8、二醇脂质体在小鼠体内的药动学过程呈明显的三室模型，不同于溶液剂的二室模型，在小鼠体内存在重分布现象。根素丙二醇脂质体在肝、脾等脏器分布较多，具有肝脾靶向性。(6)药效学实验结果表明葛根素对酒精一陛／Lvs复合因素小鼠肝脏损伤时肝实质炎症损伤性改变及脂质代谢紊乱有一定的改善作用，其中葛根素丙二醇脂质体显著降低了肝损伤小鼠血清AST，ALT，但其他指标脂质体组和溶液剂组没有显著差异。结论葛根素丙二醇脂质体的制备条件温和，工艺简单可行，制得的产品包封率温州医学院硕士学位论文高，稳定性好，