荚膜透明质酸在新生隐球菌穿越肺泡-毛细血管屏障过程中的作用研究

《荚膜透明质酸在新生隐球菌穿越肺泡-毛细血管屏障过程中的作用研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、南方医科大学2009级硕士学位论文荚膜透明质酸在新生隐球菌穿越肺泡．毛细血管屏障过程中的作用研究Studyontheroleofhyaluronicacidincryptococcusneoformanspenetratingthealveolar-capillarybarrier课题来源：国家自然科学基金(81171644)广东省自然科学基金(101510515010028)专业名称学位申请人指导教师答辩委员会主席答辩委员会成员病原生物学傅美芹曹虹教授龙敏副教授江丽芳教授彭涛教授周荣教授黎诚耀教授芮勇宇教授论文评阅人赖小敏教授芮勇宇教授2012年

2、6月2日广州硕士学位论文fIiIIrllrlrlflffllllfffrllflHrlrflrlrll0Y2257694荚膜透明质酸在新生隐球菌穿越肺泡一毛细血管屏障过程中的作用研究硕士研究生：傅美芹指导教师：曹虹教授龙敏副教授摘要背景新生隐球菌是一种具有荚膜的重要条件致病真菌，广泛存在于自然界，对于一般健康人不致病，免疫力低下和免疫缺陷患者是此菌的易感人群。隐球菌病(Cryptococcosis)是由隐球菌属中某些种或变种引起的脑膜、脑、肺、骨骼、皮肤或是全身慢性或亚急性甚至急性感染。近年来由于免疫抑制剂的使用和AIDS病的增多，新生隐球菌感染发

3、病率呈明显上升趋势，已经成为一种严重危害人类健康的疾病。因此，新生隐球菌的研究已受到全球真菌研究学者的高度重视。新生隐球菌(Cryptococcusneoformans)主要致病途径是以孢子的形式经由呼吸道吸入，通过无症状的肺部感染，然后新生隐球菌穿越肺泡．毛细血管屏障入血引起其他深部组织感染(主要是中枢神经系统)。其发生的关键步骤为肺泡中的新生隐球菌穿越肺泡一毛细血管屏障，又称血气屏障(bloodairbarrier,BAB)，位于肺泡与肺泡毛细血管之间，由六层组成：肺表面活性物质的液体层；肺泡上皮细胞层；上皮基膜；肿泡与毛细血管之问的问隙；毛细

4、血管的基膜；肺微血管内皮细胞(humanpulmonarymicrovascularendothelialcell，HPMEC)。其功能是使肺泡中02与毛细血管血液内的C02顺利完成交换，并有防御病菌入侵和防止毛细血管内其他物质流失的作用。其中肺泡．毛细血管屏障主要的组成部分摘要是肺微血管内皮细胞。新生隐球菌成功穿越肺泡．毛细血管屏障需要经过黏附及侵袭进入肺微血管内皮细胞，目前人们对新生隐球菌侵入肺泡．毛细血管屏障的分子机制所知甚少，是新生隐球菌疾病防治需解决的重要问题。多糖荚膜是新生隐球菌经典的毒性因子，是新生隐球菌逃避宿主免疫的主要毒性因子。A

5、mbroseJong等研究表明：新生隐球菌荚膜成分．透明质酸(hyaluronicacid，HA)是由新生隐球菌的CPSl基因编码合成，目前已经利用染色体同源重组技术，构建了新生隐球菌B4500F02株的CPSl基因缺失株TYCC645432，CPSI敲除菌株检测不到HA，且对脑微血管内皮细胞的粘附率明显降低，证明HA作为一种粘附分子，在与脑微血管内皮细胞相互作用过程中具有重要意义，是粘附脑微血管内皮细胞的重要毒力因子。脑微血管内皮细胞上CD44是新生隐球菌HA的受体，新生隐球菌感染脑微血管内皮细胞后，经过一系列信号转导使细胞骨架重排，使新生隐球菌

6、进入宿主细胞；CD44是属于黏附因子家族的跨膜糖蛋白，它广泛表达于多种内皮细胞、间充质细胞、造血干细胞及中胚层来源的细胞和组织，分子量约80．95KD，可以与HA、GAG、胶原、层黏连蛋白、纤黏连蛋白、选择蛋白等结合，由于在很多细胞研究发现CD44是HA的受体，我们推断在HPMEC也存在CD44，新生隐球菌荚膜HA与HPMEC上的CD44结合是其入侵机制的一部分。动物实验对于系统性研究新生隐球菌感染机理是至关重要的，常用的动物模型主要有四种，分别为小鼠、豚鼠、大鼠和兔，其中小鼠是对新生隐球菌最为敏感的动物，因此，小鼠是新生隐球菌研究最常用的动物模型

7、。根据实验需要、感染部位的不同，新生隐球菌目前常用的感染造模方法主要有腹腔、静脉、鼻腔、气管内和颅内注射接种等。由于新生隐球菌通常是由呼吸道吸入而引起感染，为明确荚膜HA是否参与新生隐球菌黏附和侵袭肺泡．毛细血管屏障的致病过程，需要通过动物实验观察新生隐球菌穿越肺泡．毛细血管屏障的能力，要模拟其正常感染，可通过雾化吸入装置的感染方式让小鼠自然感染新生隐球菌，目前超声雾化吸入已经成功地应用于多种动物吸入性细菌感染，由于新生隐球硕士学位论文菌感染主要发生于免疫力低下的人群中，因此研究新生隐球菌的致病机理包括应用免疫抑制的动物模型与新生隐球菌致病的关系。

8、目的本研究将利用肺微血管内皮细胞一HPMEC(humanpulmonarymicrovascularendothelial