hacat细胞和新生隐球菌体外作用前后基因表达谱的研究

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1、第二军医大学硕士学位论文HaCaT细胞与新生隐球菌体外作用前后基因表达谱研究摘要目的：1．观察新生隐球菌与HaCaT细胞在体外共培养2h、4h、12h、24h后光镜下的形态学改变、两者的黏附及融合情况。2．比较实验组(新生隐球菌与HaCaT细胞共培养24h)与对照组(HaCaT细胞单独培养24h)基因表达水平的改变，筛选差异表达基因，了解新生隐球菌与HaCaT细胞体外相互作用的分子机制。方法：1．原代HaCaT细胞经2—3代传代培养，生长至95％融合贴壁，调整细胞浓度为I×10¨个／ml，再加入密度为lxlOH个／mL的菌悬液或新鲜配置的细胞培养液，混合

2、后于37℃5％C0。培养箱中共培养24h，不同时间点相差显微镜下观察。2．人全基因组表达谱芯片检测实验组与对照组差异表达基因并分析。结果：1．随时间延长HaCaT细胞与新生隐球菌发生黏附及融合，未见明显碎裂破坏等现象。2．实验组与对照组在基因表达水平共有138条基因发生表达上调，其中127条为已知基因，11条为未知基因，涉及细胞黏附与内吞、细胞凋亡、转录调控及信号转导、氨基酸残基磷酸化等多个生物学进程，可能与新生隐球菌侵袭HaCaT细胞的过程有关。讨论：新生隐球菌与HaCaT细胞在体外共培养条件下可以发生黏附内吞，同时HaCaT细胞自身凋亡增加，这可能是

3、由于隐球菌诱导HaCaT细胞相关基因表达上调所致，由此我们认为新生隐球菌感染HaCaT细胞后被其黏附内吞，并造成HaCaT细胞自身死亡是皮肤隐球菌病发生的可能机制。关键词：角质形成细胞；新生隐球菌；基因芯片；基因表达谱Abstractobjective：1．Toobservethechangeofmorphology．adhesionandintegrationwith1ightmicroscopewhencryptococcusneoformanscoculturingwithHaCaTkeratinocytesfor2hour，4hour,12hou

4、rand24hourinvitro．2．TolearnabouttheinteractionofcryptococcusneoformansandHaCaTkeratinocyteswithgeneexpressionprofilesmicroarrayinvitro．Methods：1．HaCaTkeratinocytesweresubculturedfor2to3timesandmodulatedthecellsconcentrationtol×10”7／nllwhenitapproaches95％fusioncondition．thencocult

5、uredinincubatorat37℃and5％CO，wimlxl0卜5／InLyeastsuspensionor矗陀shcellculturefluids，andobervedwithphrase．contrastmicroscopeatdifferenttimepoints．2．Detectthechangeofgeneexpressionprofilesinexperimentalgroupandcontrastgroupwithhomosapiensgenomeexpressionprofilesmicroarray．Results：1．W．e

6、couldseetheadhesionandanastc}mosisofcryptococcusneoformansandHaCaTkeratinocytes，buttherewasnoapparentsplittingorfracturephenomenon．2．Ⅵ，efoundl38genesup．regulatedinexpressionlevelwhentheexperimentalgroupcomparedtothecontrolgroup，andofwhichl27genesWasknowntolIswhile1lgenesWasunkonw

7、n．Theyinvolvedineelladhesionandendocytosis，apoptosis，transcriptionregulation，signaltransduction，proteinaminoacidphosphorylationandmanyotherbiologicalprocesses，andmayberelatedtotheinvasionofcryptococcusneoformanstoHaCaTkeratinocytes．Discussion：HaCaTkeratinocytescouldadheretoandswa

8、llowcryptococcusneofornlansduringcocultu