舍曲林抗新生隐球菌的体外及动物实验研究

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1、第二军医大学博士学位论文舍曲林抗新生隐球菌的体外及动物实验研究姓名：周南申请学位级别：博士专业：皮肤病与性病学指导教师：廖万清201206舍曲林抗新生隐球菌的体外及动物实验研究研究背景和目的摘要新生隐球菌是一种严重危害人类健康的医学致病真菌，它不仅侵犯免疫缺陷患者，也经常感染正常人群。近年来，由于免疫抑制剂、皮质类固醇激素、抗生素的广泛应用、器官移植、静脉插管和体内植入人工物等侵袭性诊疗技术的广泛应用以及艾滋病患者的增多，隐球菌的感染率不断增高。目前临床上常用的治疗隐球菌性脑膜炎的抗真菌药物主要有以下几种：氟康唑、氟胞嘧啶、两性霉素B和两性霉素B脂质体等。这些抗真菌药物的作用

2、机制不尽相同，虽然都已广泛应用于临床，但仍各有优缺点，大部分药物在脑脊液中的浓度偏低，所以隐球菌脑膜炎的治疗仍然存在着挑战，需要发现更新更好更成熟的抗隐球菌的药物。舍曲林是最强的选择性5一羟色胺摄取抑制剂之一，主要用于各种抑郁症及强迫症的治疗，是目前广泛使用的治疗严重月经前期综合症的一线用药。2001年奥地利学者Lass—F16rlC通过临床病例首次发现了舍曲林具有抗白念珠菌的作用，3位同时患有月经前期焦虑障碍和复发性外阴阴道念珠菌病的患者接受了舍曲林的治疗后，复发性阴道念珠菌病没有再次发生。同时该研究小组对念株菌属的不同种及曲霉属的不同种进行了体外药敏实验，结果表明舍曲林有

3、快速的抗真菌作用。2003年该研究小组又报道推测舍fli{林町以降低白念珠菌等真菌病原体在体内的毒性。之后又有相关研究表明，舍曲林和伊曲康唑或两性霉素B的联合用药可以对某些曲霉起到协同作用。但是舍曲林对新生隐球菌的作用目前还没有相关的研究报道，美国德克萨斯A&M大学生物系的林晓蓉学者在实验室中检测到新生隐球菌grubii变种比白念珠菌属对第二军医大学博士学位论文舍曲林更为敏感，因此我们在合作的基础上进行了舍曲林对新生隐球菌不同血清型和荚膜缺陷株的药物敏感性的检测，来进一步检测不同浓度的舍曲林对不同血清型新生隐球菌的生长抑制作用。并通过构建新生隐球菌感染小鼠的动物模型，对舍曲林

4、体内抗新生隐球菌的作用进行了进一步的研究和探讨。通过体外不同浓度舍曲林药物溶液与新生隐球菌菌悬液共同培养的方法，比较不同时间点，舍曲林对新生隐球菌的生长抑制作用，以及舍曲林对新生隐球菌不同血清型和荚膜缺陷株的作用。通过BABL／c小鼠尾静脉注射新生隐球菌菌悬液的方法构建隐球菌性脑膜炎小鼠的动物感染模型，探讨舍曲林对隐球菌性脑膜炎小鼠是否有治疗作用，并且通过舍曲林与氟康唑联合应用，探讨两者药物之间是否有协同作用。结果4h、6h、8h时舍曲林对新生隐球菌体外生长的抑制作用与RPMI培养基生长对照组比较，81．tg／m1以下浓度的舍曲林对新生隐球菌的生长抑制率差异不明显；在8ug／

5、ml'---64itg／ml浓度时，舍曲林对新生隐球菌的生长抑制作用与生长对照组比较有差异(P<0．05)，而且随着舍曲林药物浓度的升高，这种抑制作用更加明显，且这种抑制作用有浓度依赖性；当舍曲林浓度达至[J32lag／m1以上时，隐球菌在舍曲林的作用下，菌悬液的浓度低于原先浓度，提示此浓度的舍曲林对新生隐球菌不仅具有生长抑制作用，而且有一定的杀灭作用。在比较舍曲林对新生隐球菌A血清型、D血清型及荚膜缺陷株之间的作用时，发现舍曲林对这三种菌株的生长抑制作用没有明显的差异。予以灌胃处理10mg／kg或20mg／kg齐lJ量的舍曲林都可明显降低新生隐球菌模型小鼠第l天脑组织及肺组

6、织的新生隐球菌真菌负荷量，差异具有统计学意义；但随着时舍曲林抗新生隐球菌的体外及动物实验研究间的延长，低浓度舍曲林对感染小鼠脑组织的新生隐球菌负荷量的影响无统计学差异，高浓度舍曲林对脑组织单独真菌负荷量有统计学差异，不同浓度的舍曲林都可有效的抑制肺组织新生隐球菌的真菌负荷量。脑组织及肺组织中，舍曲林治疗对新生隐球菌的抗菌效果均不如氟康唑，具有统计学差异。舍曲林与氟康唑联合治疗对新生隐球菌模型小鼠肺组织的抗菌效果强于单用舍曲林或氟康唑。结论体外药敏实验提示舍曲林有直接的抑制新生隐球菌生长的作用，舍曲林的剂量越高，生长抑制作用越明显，而且可以表现为杀菌作用。体内动物实验发现低剂量

7、和高剂量的舍曲林都可明显降低感染小鼠实验早期脑、肺组织的新生隐球菌负荷量，但在实验后期，低浓度的舍曲林对感染小鼠脑组织失去抑菌作用。脑、肺组织中，舍曲林治疗对新生隐球菌的抗菌效果均不如氟康唑。舍曲林与氟康唑联合用药对新生隐球菌模型小鼠肺组织的抗菌效果强于单用舍曲林或氟康唑。关键词新生隐球菌，舍曲林，体外实验，动物实验BackgroundandpurposeAbstractCryptococcusneoformansisakindofmedicalpathogenicfungiwhichhasseriou