端粒酶抑制剂作用人肝癌、鼻咽癌细胞株前后基因表达谱和蛋白表达谱变化的研究

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1、广西医科大学硕士学位论文端粒酶抑制剂作用人肝癌、鼻咽癌细胞株前后基因表达谱和蛋白表达谱变化的研究姓名：容敏华申请学位级别：硕士专业：劳动与环境卫生学指导教师：何敏20070501独创性声明秉承学校严谨的学风与优良的科学道德，本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，不包含本人或他人已申请学位或其他用途使用过的成果。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了致谢。申请学位论

2、文与资料若有不实之处，本人承担一切责任。论文作者签名：日期：彬多，保护知识产权说明本人完全了解广西医科大学有关保护知识产权的规定，即：研究生在校攻读学位期间，博士后工作人员、人才小高地工作人员在校工作期间，论文工作的知识产权单位属广西医科大学。本人保证在校期间和离校后，发表或使用论文工作成果时署名第一作者单位均为广西医科大学。学校有权保留论文，允许论文被查阅和借阅；学校可以公布论文的全部或部分内容，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。论文作者签名：日期：砷‘’硕士学位论文端粒酶抑制剂作用肝癌、鼻咽癌细胞株前后基因表达

3、谱和蛋白表达谱变化的研究端粒酶抑制剂作用肝癌、鼻咽癌细胞株前后基因表达谱和蛋白表达谱变化的研究中文摘要端粒酶(telomerase)是由RNA和蛋白质构成的一种特殊的DNA聚合酶，具有逆转录酶活性。端粒酶能以自身RNA为模板，反转录合成端粒的重复的单元TTAGGG加到染色体末端，阻止端粒随细胞分裂而缩短。已证实端粒酶在肿瘤发生、发展过程中起着重要的作用，近90％的肿瘤细胞都有端粒酶活性，而正常细胞或良性肿瘤细胞中几乎无端粒酶活性，端粒酶已成为当今肿瘤新的标志物和肿瘤治疗的新靶点，但目前端粒酶活性的调控机制尚未明确。近年来国

4、内外学者致力于开发各种不同作用机制的端粒酶抑制剂，以期寻找一类安全，有效的，毒副作用小的的全新抗肿瘤药物。但以往研究发现，不同作用机理的端粒酶抑制剂在不同类型细胞的生物分子靶点不一，即使在同种细胞中，不同的端粒酶抑制剂也存在多分子靶点。因此，如果能进一步明确不同端粒酶抑制剂作用的共同分子靶点，寻找影响端粒酶活性的关键调控因素，将有助于揭示端粒酶活性的调控机制，为端粒酶抑制剂的临床应用及新的端粒酶抑制剂的开发提供理论依据。目的：通过分析不同作用机制端粒酶抑制剂分别作用肝癌细胞株SMMC一7721、鼻咽癌细胞株CNE2后基因表

5、达谱和蛋白表达谱的变化情况，挖掘不同端粒酶抑制剂影响的共性变化基因和共同差异蛋白，探讨影响端粒酶活性的可能分子靶点。方法：l、MTT试验检测三种不同机制端粒酶抑制剂：EGCG，针对hTR的反义核苷酸序列ASODN和针对hTR的正义核苷酸序列SODN，分别抑制肝癌细胞株S删c一7721、鼻咽癌细胞株CNE2的最佳作用浓度。2、培养两种癌’2硕士学位论文端粒酶抑制荆作用肝癌、鼻咽癌细胞株前后基因表达谱和蛋白表达谱变化的研究细胞至对数生长期，以EGCG，ASODN和SODN的最佳作用浓度作用于细胞，提取药物作用后细胞的RNA，运

6、用AffymetrixU133A2．0人基因组表达谱芯片检测基因表达谱的变化，筛选共同差异基因。3、用EGCG，ASODN，SODN，ADM，ATRA，AZT，HAODN，HSODN八种不同的端粒酶抑制剂分别作用于SMMC-7721和CNE2细胞，提取药物作用后细胞的总蛋白，运用基层辅助激光解析时间飞行质谱(SELID—TOF—MS)技术检测蛋白的变化，筛选共同差异蛋白。结果：1、MTT试验结果：以细胞抑制率达50％左右的药物浓度为最佳作用浓度，作用48h后，EGCG，ASODN及SODN对SMMC-7721细胞的最佳作用

7、浓度分别为：125．0mg／L，6．0pmol／L，6．0umol／L；对CNE2细胞的最佳作用浓度同样为：125．0mg／L，6．0弘mol／L，6．0pmol／L。2、EGCG，ASODN及SODN三种端粒酶抑制剂作用两种癌细胞后基因表达谱变化程度不一：(1)肝癌SMMC-7721细胞中，经EGCG作用后，表达差异2倍以上的基因共196个，包括上调基因132个和下调基因64个；ASODN作用后表达差异基因2025个，包括上调基因897个，下调基因1128个；经SODN作用后表达差异基因2337个，包括上调基因1254个

8、，下调基因1083个。ASODN和SODN均改变了14500个基因中近14％基因的表达，EGCG影响表达的基因则不足2％。(2)鼻咽癌CNE2细胞经EGCG作用后，表达差异2倍以上的基因3193个，包括上调基因1217个，下调基因1976个；ASODN作用后表达差异基因262个，包括上调基因158个和下