球毛壳nd35菌株实时荧光定量pcr检测体系的建立及其在植物中的定殖检测

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1、山东农业大学硕士学位论文球毛壳ND35菌株实时荧光定量PCR检测体系的建立及其在植物中的定殖检测姓名：刘璇申请学位级别：硕士专业：植物病理学指导教师：高克祥20120615山东农业大学硕士学位论文中文摘要球毛壳菌(Chaetomiumglobosum)ND35菌株是一株从健康毛白杨(Populustomentosa)分离出的内生真菌。表现出对多种病原真菌的拮抗活性，其次生代谢物质对多种农作物有较好的促生作用，并且能增强其抗病性。为了解球毛壳ND35菌株在不同植物中的定殖情况，本文主要进行了球毛壳ND35菌株的

2、实时荧光定量PCR检测技术条件的建立及和优化、运用实时荧光定量PCR技术检测不同植物不同组织中球毛壳ND35菌株的定殖情况、土壤中球毛壳ND35菌株生长繁殖情况的研究，取得了如下成果：l、利用已经获得的球毛壳ND35菌株特异片段设计了一对用于实时荧光定量PCR检测的引物，里l物庄到蕴丛旦三§：!；Q￡!￡Q￡△Q￡I￡!QQI鳗Q鱼I鱼：盟旦三§：21Q￡￡鱼△ⅡQ￡￡￡丛QI￡￡△￡￡!￡。以球毛壳ND35菌株基因组DNA为模板，以甘油醛．3．磷酸脱氢酶的基因为内参基因，利用此对引物对实时荧光定量PCR反应

3、的最佳体系、反应程序及灵敏度检测等进行了初步探索，得到了较为理想的结果。2、利用优化的实时荧光定量PCR反应体系，对球毛壳ND35菌株在杨树、黄瓜、辣椒、烟草中的定殖情况进行了检测，结果表明，球毛壳ND35菌株在这几种植物的不同组织中均能定殖，但定殖情况在不同植物、不同组织中有较大差异，特别是一年生杨树不同组织在不同生长季节差别尤为显著，生长期越长的植物中定植情况差异越显著。3、利用实时荧光定量PCR反应体系，对球毛壳ND35菌株在土壤中的生长情况进行了检测，结果表明，利用建立的实时荧光定量PCR反应体系同样

4、也可以检测球毛壳ND35菌株在土壤中的生长繁殖情况。关键词。球毛壳ND351定殖；实时荧光定量PCRs检测球毛壳ND35菌株实时荧光定量PCR检测体系的建立及其在植物中定殖的检测AbstractChaetomiumglobosumND35strainisakindofendophyticfungusisolatedfromPopulustomentosa．Thisfungusshowsitsantagonismagainstmanyplantpathogens，andthesecondarymetabolit

5、esproducedbyND35promotethegrowthofplantsandinduceresistancetoplantdiseases．InordertounderstandthemodeofcolonizationonplantbyCglobosum，thereal—timequantitativePCRtechnologyhasbeenusedandthreeresearchsectionshavebeeninvestigatedsuchasdetectionconditionsforest

6、ablishmentandoptimizationforCglobosum，colonizationondifferentplantanddifferenttissuesanditscolonizationinsoil，etc．Theresultshavebeenobtainedasfollowings：Asetofprimersforreal-timePCRWaSdesignedbyusingspecificsegmentsofCglobosum．Thesequenceofprimersfollowsas：

7、ND35-1：GCTCGCAGCTCTGGTGCGGTG,ND35—2：GCCGATTGCCCATGTCCACCTC．Besides，theoptionalreal-timefluorescencequantitativePCRsystem,thesensitivityandamplificationprogramhavebeeninvestigatedbyusingthenewspecificprimers．Chaetomiumglobosumsti菌nND35genomieDNAservedastempl

8、ateandthegeneofcodingtheglyceraldehyde·-3··phosphatedehydrogenase(GAPHD)servedasareferencegene．Positiveresultshavebeengotinthisstudy．ThemodeofcolonizationofCglobosuminpoplar,cucumbers，peppers，tobaccoWa