实时荧光定量pcr在植物病害中的应用

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1、中国惑学通攉2009，25(07)：52—56ChineseAgriculturalScienceBulletin实时荧光定量PCR在植物病害中的应用徐小刚，刘雅婷(云南农业大学农学与生物技术学院，昆明650201)摘要：实时荧光定量PCR技术作为一项新兴技术，越来越受到人们的重视。它以快速、准确定量、便捷等优点广泛应用于科学研究各个领域，近年来，实时荧光定量PCR技术在植物病害研究上不断深入，大大提高了植物病害的检测效率和监测防治水平。结合了最近几年来应用于检测和鉴定植物病原病害的实时荧光定量PCR过程

2、中引物与探针的设计、反应过程、结果评价情况，综合论述了实时荧光定量PCR技术在由真茵、细菌、病毒、线虫引发的植物病害的检测与应用。关键词：实时荧光定量PCR；Ct值；植物病害；引物设计；灵敏度中图分类号：$432．4+1文献标识码：AApplicationofReal-timeFluorescenceQuantitativePCRinPlantDiseaseXuXiaogang，LiuYating(YunnanAgriculturalUniversityinAgricultureandBiotechnol

3、ogyInstitute，Kunming650201)Abstract：Asanemergingtechnology，moreandmorepeoplepayattentiontothereal—timefluorescencequantitativePCR．Ithasbeenwidelyusedindifferentresearchareas，sinceitisfast，accurate，andeasyuse．Inrecentyears，withthedevelopingandmoredetailedo

4、fthetechnology，ithasgreatlyimprovedtheeficiencyofdetectionandpreventionandtreatmentinplantdisease．Inthisreview．itwasintrodueedthatreal—timefluorescencequantitativePCRdetectsplantdiseaseinfectedbythefungus，bacterialvirusandnematode，thedesignofprimersandpro

5、bes，thereactionsandtheevaluationofreal—timefluorescencequantitativePCR．Keywords：real—timefluorescencequantitativePCR，Ct，plantdisease，primerdesign，sensitivity实时荧光定量PCR(Rea1．timefluorescence人们利用实时荧光定量PCR技术本身的优越性把其quantitativePCR，RTFQPCR)是在常规PCR基础上把广泛运用于医学诊断

6、、海关检验检疫、国防军事、新型荧光共振能量转移与荧光标记探针结合，巧妙地把核农业、基础研究等领域n。。目前尤其在动物医学病理酸扩增、杂交、光谱分析和实时检测技术融合在一起的和分子生物学研究领域应用十分广泛。而实时荧光一项创造性技术，它具有快速、灵敏、高通量、特异性定量PCR技术在植物病害研究上的报道较少，但是最强、自动化程度高、重复性好、准确定量等特点。1983近几年实时荧光定量PCR技术的发展有力地促进了年美国PECetus公司的MULLIS博士发明了PCR技植物病害检测研究水平，而且发挥着越来越重要的

7、作术，1992年HIGUCHI提出了实时PCR的设想”，继而用，笔者将重点在这方面进行综合论述。在1996年美国AppliedBiosystems公司研究出实时荧1实时荧光PCR的原理光定量PCR技术。实时荧光定量PCR技术发明至今，实时荧光定量PCR的原理是以荧光共振能量转基金项目：云南省自然基金项目‘‘蓟马传毒特性与番茄斑萎病毒病发生流行关系研究”(No．2005C0036M)：“番茄斑萎病毒(TswV)抗性破坏株系进化机制研究”(2007C0036M)；云南省教育厅自然基金项目“蓟马传毒特性与番茄斑

8、萎病毒病发生流行关系研究”(No．5Y0171B)；国家973项目“农业生物多样性控制害虫的效应、原理和方法”(2o06cBl002O4)。第一作者简介：徐小刚，男，1984~E，浙江衢州人，硕士在读，专业：生物化学与分子生物学。研究方向：植物病毒病害鉴定。通信地址：650201云南省昆明市黑龙潭云南农业大学73号信箱，Tel：0871—5230273，E—mail：xiaoxiaogang2003@126．con。通讯作者：