实时荧光定量PCR及其在传染性疾病检测中的应用.pdf

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1、生物技术通讯LE3TERSINBIOTECHNOLOGYVo1．22No．5Sep．．201175ldoi：10．3969~．issn．1009—0002．2011．05．035综述实时荧光定量PCR及其在传染性疾病检测中的应用邹红霞，梁国鲁西南大学园艺园林学院，重庆40[摘要]实时荧光定量PCR技术被广泛应用于实验研究、临床检测中。与普通的PCR相比，实时荧光定量PCR技术具有特异性强、灵敏度高、重复性好、定量准确、速度快、全封闭反应等优点。我们综述了实时荧光定量PCR技术的原理、定量方法，及其在传染性疾病检测研究中的应用。[关键词]实时荧

2、光定量PCR；原理；定量方法；传染性疾病[中图分类号]Q789[文献标识码]A[文章编号]1009-0002(2011)05—0751—04Real-TimeQuantitativePCRTechnologyanditsApplicationinDe—tectionofInfectiousDiseasesZOUHong—Xi6LlANGGuo—LuHorticultureandLandscapeArchitectureCollege，SouthwesternUniversity，Chongqing40，China[Abstract]Inrec

3、entyears，real-timequantitativePCRtechnologyhasbeenwidelyusedinvariousexperimentalstudies，clinicaltestingandproduction．ComparedtonormalPCR，real—timequantitativePCRtechnologyisad—vancedinspecificity，sensitivity，reproducibility，accuracy，speedandclosed．Thispaperisareviewaboutth

4、eprinciple，quantitativemethodofreal—timefluorescencequantitativePCRtechnology，andtheapplicationindetec—tionofinfectiousdiseases．[Keywords]real—timefluorescencequantitativePCR；principle；quantitativemethods；infectiousdiseases1985年，美国Perkin—ElmerCetus公司发明了的情况下，样本DNA含量与扩增产物的对数成

5、正具有划时代意义的聚合酶链反应(Polymerasechain比，由于反应体系中的荧光染料或荧光标记物(荧光reaction，PCR)，人们梦寐以求的体外无限扩增核酸探针)与扩增产物结合发光，其荧光量与扩增产物量片段的愿望成为现实。1992年，Higuchi最早提出了成正比，因此通过检测荧光量即可测定样本核酸量。实时PCR的设想Ⅲ；1996年美国AppliedBiosystems通过Ct值和标准曲线的分析对起始模板进行定量公司推出实时荧光定量PCR技术(real—timefluo．分析。Ct值(cyclethreshold)，即PCR扩增过程

6、中扩reseentquantitativePCR，RT-FQ-PCR)。RT—FQ—增产物的荧光信号达到设定的阈值时所经过的扩增PCR相比传统的PCR具有以下重要优点：它使用荧循环次数，它与模板的起始拷贝数的对数存在线性光基团对PCR每个循环中的扩增产物进行实时监关系，模板DNA量越多，荧光达阈值的循环数越少，测，操作简便且具有很高的敏感性和特异性；实现即Ct值越小。利用已知起始拷贝数的标准品可做出了定性到定量分析的飞跃；DNA扩增及其分析过程标准曲线，因此只要获得未知样品的Ct值，即可从均在同一封闭系统中完成，避免了样品和产物的污标准曲线上

7、计算出该样品的起始拷贝数_】】。染，且不需要复杂的产物后续处理，从而能得到可在实时荧光PCR技术的发展过程中，2个重要靠和可重复性的结果；动力学范围宽，允许对样品的发现起着关键的作用：①在20世纪90年代早期，的靶序列进行不同数量级的分析。TaqDNA多聚酶的5核酸外切酶活性被发现，它能降解特异性荧光标记探针，因此使得间接检测PCR1基本原理产物成为可能；②此后，荧光双标记探针的运用，使简单地说，RT—FQ—PCR的基本原理就是样本[收稿日期]2011—02—28核酸扩增呈指数增长，在反应体系和条件完全一致作者简介1984-)z0h。老生物技

8、术通讯752LETrERSINBIOTECHNOLOGYVo1．22No．5Sep．，2011得在一个密闭的反应管中能实时监测反应全过程。每个循环增加一倍的产物数量