慢性心衰大鼠下丘脑室旁核内nf-κb与血浆醛固酮、心肌细胞凋亡的关系

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1、泰山医学院硕士学位论文慢性心衰大鼠下丘脑室旁核内NF--κB与血浆醛固酮、心肌细胞凋亡的关系姓名：吴媛媛申请学位级别：硕士专业：内科学指导教师：贾如意2012-05慢性心衰大鼠下丘脑室旁核内NF—KB与血浆醛固酮、心肌细胞凋亡的关系研究生：吴嫒嫒专业：内科学导师：贾如意教授中文摘要背景和目的慢性心力衰竭(CHF)是各种心脏疾病的终末阶段，以心室重构和神经内分泌过度激活为基本特征的临床综合征。随着社会进入老龄化，心血管疾病发病率的增高，CHF的发病率正逐年上升。下丘脑室旁核(PVN)作为内脏活动和神经内分泌调节的重要核团，是调控交感神经传出活动最重要的中枢位点和整合部位。研究证实心衰时PVN

2、内神经化学因素如活性氧簇(reactiveoxygenspecies，ROS)、炎性细胞因子(proinflammatorycytokines，PIC)等的改变，可能是促发心衰时交感神经传出增加的重要因素。核因子一KB附F一1(B)广泛分布于全身细胞和组织，在免疫应答和炎症反应等过程中参与众多因子的基因转录调控过程。近年来研究发现，NF—KB在心衰大鼠重要的心血管调节中枢PVN内表达明显增多，NF一1(B通过一系列信号转导途径介导CHF时循环细胞因子的中枢作用，诱导炎性反应和细胞凋亡，参与心力衰竭的发病机制。慢性心衰时循环中高水平的醛固酮亦可通过中枢效应影响心室重建，其主要通过心肌的醛固酮

3、受体介导心肌肥厚和心肌重构，其增加是心衰发生的独立的危险因素。本研究采用冠脉左前降支结扎术致急性心肌梗死制备大鼠cHF模型，饮水中分别给予NF．1(B拮抗剂毗咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)及选择性盐皮质激素受体拮抗剂依普利酮(EPL)干预处理后，观察血浆醛固酮水平与PVN内NF一1(B蛋白表达的变化对心衰进程的影响，探讨其相互作用及其对心肌细胞凋亡的调控，为心衰的中枢研究及治疗探索新的思路。材料与方法1．模型制各成年健康雄性SD大鼠70只，体重250～3009，由山东中医药大学实验动物中心提供。随机分为：慢性心衰组(CHF组)和假手术组(SHAM组)。CHF组行冠脉左前降1支结扎术致急性

4、心肌梗死，制备大鼠CHF模型；假手术组只穿线不结扎。CHF组再随机分为未治疗组(CHF组，n=20)、NF一1(B抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐干预组(PDTC组，n=20)和盐皮质激素受体拮抗剂依普利酮干预组(EPL组，n=20)，假手术组(SHAM组，n=10)作为正常对照。治疗组大鼠饮水中分别给予PDTC(150mg／1(g／d)，或EPL(30mg瓜g／d)，治疗持续6周。2．心衰程度的判断6周后，测定左心室湿重／体重比(LVW／BW(m∥g))，右心室湿重／体重比(IWW／BW(mg／g))和肺湿重／体重比(LW／BW(m∥g))评价心功能及心衰程度。3．放射免疫法检测血浆醛固酮水

5、平大鼠颈动脉血注入冰水预冷的EDTA抗凝管中，混匀后离心(4℃，3000印m，lOmin)，取上清置于Tube管中，采用放射免疫法测定血浆醛固酮水平。4．TuNEL法观察心肌细胞凋亡制备心肌组织石蜡标本，心肌细胞凋亡采用T切NEL法检测。细胞核呈棕褐色或者呈棕黄色者为凋亡阳性细胞，光镜下判定其分布情况，每张切片拍摄5个阳性视野。心肌细胞凋亡率是凋亡阳性细胞数占观察心肌细胞数的比例，心肌细胞凋亡指数(AI)(％)=(心肌细胞凋亡细胞核数／正常心肌细胞核数)×100％。应用SPSSl3．O统计学软件分析。5．westemblot法检测下丘脑室旁核内NF—lcB蛋白表达提取下丘脑室旁核蛋白后，采

6、用Westemblot检测下丘脑室旁核内NF一1(B蛋白水平。蛋白采用聚丙烯酰胺变性凝胶方法分离，蛋白经电转膜法转移到硝酸纤维膜上，脱脂奶粉封闭2h，分别加入小鼠抗兔NF．出p65(1：200)，4℃孵育过夜，辣根酶标记山羊抗兔IgG(1：2000)，37℃孵育2h，化学发光试剂显影，显影胶片应用UVP凝胶图像扫描系统扫描吸光度，实验组吸光度值与对照组吸光度值比值即为结果。蛋白表达水平以其与B．actin光密度比值来表示。应用SPSSl3．O统计学软件分析。结果1．CHF组大鼠左心室湿重／体重比(LVW／BW(mg／g))，右心室湿重／体重比(RVW／BW(m∥g))和肺湿重／体重比(L，

7、W／BW(m∥g))均明显高于SH砧vI组，组间差异有统计学意义(P<0．05)。饮水中给予PTDC或EPL治疗后各项心功能指标均降低，且EPL组低于PTDC组，组间差异有统计学意义(P