弓形虫感染的人巨噬细胞micrornas差异表达

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1、温州医学院硕士学位论文弓形虫感染的人巨噬细胞microRNAs差异表达姓名：吴翡斐申请学位级别：硕士专业：病原生物学指导教师：梁韶晖2012-05-22温州医学院硕士学位论文弓形虫感染的人巨噬细胞microRNAs差异表达中文摘要刚地弓形虫(Toxoplasmagondii)是一种属孢子纲，真球虫目的专性细胞内寄生原虫，广泛分布于世界各地，能寄生于包括人在内的几乎所有温血动物的有核细胞内，当弓形虫感染免疫抑制病人(如器官移植、HIV病人)时可以引起严重危害，孕妇在孕期感染弓形虫后会引起流产，胎儿发育畸形，甚至死亡。microRNAs(miRNA

2、s)是近年来发现的能够在转录后水平调节基因mRNA表达的一组进化上保守的非蛋白编码小RNA分子，广泛存在于从病毒、线虫、植物到动物体内。microRNAs主要参与发育调控、器官形成、肿瘤生成、细胞增殖与凋亡、病原体与宿主的相互作用等生物学过程。最近一些研究发现，microRNAs参与调控免疫细胞的产生和分化、天然免疫和获得性免疫应答，且与免疫系统疾病密切相关。弓形虫感染宿主后产生获得性免疫应答，主要是通过诱导巨噬细胞和T淋巴细胞等产生多种生物活性的细胞因子而发挥免疫调节作用。这种由弓形虫感染产生的获得性免疫应答对于宿主的长期存活和抗再感染是必要

3、的，但弓形虫又要避免诱导过强的免疫而导致自身被消灭。弓形虫在人群和动物中的高感染率和低发病率也说明了弓形虫在触发和抑制宿主的免疫应答方面具精细的调节机制。因此，弓形虫感染可能诱导了宿主细胞的miRNAs差异表达，而差异表达的miRNAs调控宿主细胞的基因表达而引起蛋白效应分子的表达量变化，从而来调控宿主细胞抗弓形虫感染的免疫应答。本研究用miRNAs表达谱测序结合miRNAs芯片分析得到弓形虫感染后的人巨噬细胞U937株和对照组人巨噬细胞U937株差异表达的miRNAs，并用实时荧光定量PCR和Northem杂交来验证差异表达miRNAs。为进

4、一步研究差异表达的人巨噬细胞miRNA在调控人巨噬细胞抗弓形虫感染中的功能奠定了基础。目的发现弓形虫感染的人巨噬细胞U937差异表达的mi砌妊，为进一步研究人巨噬细胞差异表达的rni砌妊在调控人巨噬细胞抗弓形虫感染中的功能奠定基础。方法1人巨噬细胞U937的培养，弓形虫的感染，microRNAs测序分析及芯片分析4温州医学院硕士学位论文1．1培养人巨噬细胞U937，实验组为弓形虫速殖子与U937共孵育24h，对照组为热灭活的弓形虫速殖子与U937共孵育2411。1．2对两组人巨噬细胞U937进行miRNAs表达谱测序分析miRNAs的差异表达。

5、1．3对两组人巨噬细胞U937进行miRNAs芯片分析miRNAs的差异表达。1．4分析miRNA表达谱，挑选出两组样本间表达差异的miRNA。2实时荧光定量PCR和Northem杂交验证microRNA差异表达。2．1根据miRNAs表达谱测序和芯片分析结果，选取部分差异表达miRNAs进行实时荧光定量PCR验证miRNAs差异表达。2．2Northern杂交进一步验证miRNAs的差异表达结果1．miRNAs表达谱测序结合差异表达方法计算发现弓形虫感染的人巨噬细胞U937的miRNA．210等20种miRNAs表达明显上调，miRNA．19

6、08等8种miRNAs表达明显下调。2．miRNAs芯片分析和实时荧光定量PCR验证了弓形虫感染的人巨噬细胞U937其中的5种miRNAs表达上调，1种miRNAs表达下调。3．Northern杂交进一步证实了弓形虫感染的人巨噬细胞U937的miRNA．210表达明显上调，miRNA-1908表达明显下调。结论本研究证实了弓形虫感染引起了宿主细胞人巨噬细胞U937的miRNAs的差异表达，并证实了mi对临．210表达明显上调，miRNA-1908表达明显下调，为进一步研究miRNA-210和miRNA-1908在调控人巨噬细胞的信号通路和调控人

7、巨噬细胞抗弓形虫感染中的功能研究奠定了良好的基础。关键词：弓形虫；人巨噬细胞；microRNAs；表达谱测序；差异表达温州医学院硕士学位论文thedifferenceofmicroRNAsexpressioninhumanl●一·⋯●⋯macrophageintectedDylOxoplasmagondiiAbstractToxoplasmagondiiisanwidelydistributedparasitewhichspeciallyinfectnucleatedcellinmanyspeciesofwarm-bloodedanimalsi

8、ncludehuman．Ifinfectedinthepregnancy,itmaycausemiscarriage，fetalmalformatio