地塞米松对大鼠腹腔巨噬细胞抗弓形虫感染及细胞因子分泌的影响.pdf

《地塞米松对大鼠腹腔巨噬细胞抗弓形虫感染及细胞因子分泌的影响.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、动物医学进展。2014，35(7)：29—33ProgressinVeterinaryMedicine地塞米松对大鼠腹腔巨噬细胞抗弓形虫感染及细胞因子分泌的影响汪涛，李金福。，李兴暖，梅钧，龙锴，汤自豪，赵志军(1．九江学院基础医学院病原生物学教研室，江西九江332000；2．江西省高等学校系统生物学临床应用重点实验室，江西九江332000；3．贵阳医学院寄生虫学教研室，贵卅I贵阳550004；4．宁夏医科大学总医院医学实验中心，宁夏银川750004)摘要：为探讨地塞米松(DXM)对大鼠腹腔巨噬细胞抗刚地弓形

2、虫(T．gondii)和细胞因子分泌的影响，将大鼠随机分为2组，即DXM注射组和空白对照组，连续注射6d，再抽取腹腔巨噬细胞后分为4组，即DXM组和DXM+T．gondii感染组；对照组和T．gondii感染组。通过瑞一吉染色观察T．gondii在巨噬细胞内的增殖；并用半定量RT—PCR检测DXM组和对照组的大鼠腹腔巨噬细胞IFN一7、TNF—a和IL一2InR—NA表达情况用ELISA检测4个试验组细胞培养上清液中3种细胞因子的含量。结果显示，在正常大鼠腹腔巨噬细胞内T．gondii不增殖反而减少，而在DX

3、M注射大鼠后巨噬细胞内T．gondii大量增殖；同时与T．gondii感染免疫密切相关的这3种细胞因子InRNA及其蛋白的表达均被DXM明显抑制。试验表明，大鼠腹腔巨噬细胞对T．gondii具有明显的抗性；但DXM又可诱发腹腔巨噬细胞易感T．gondii，这一结果与细胞因子IFN一7、TNF—a和IL一2表达下调有关。关键词：地塞米松；大鼠腹腔巨噬细胞；弓形虫；细胞因子中图分类号：$852．72；$859．793文献标识码：A文章编号：1007—5038(2014)07—0029—05刚地弓形虫(Toxopl

4、asmagondii)是一种专性的细胞因子表达情况，可为进一步研究糖皮质激素细胞内寄生原虫，能感染所有哺乳动物的有核细胞，类药物所诱发的弓形虫感染机制奠定一定的基础。同时它也是一种机会性致病原虫L1]。对于免疫正常1材料与方法的人群来说，弓形虫的感染是呈隐性状态_2]。1．1材料糖皮质激素类药物是应用最早也是最广泛的一1．1．1虫株弓形虫RH株，由贵阳医学院寄生虫类免疫抑制剂，由于其具有良好的抗炎和免疫抑制教研室惠赠，由九江学院医学科研中心保种。特性，这就使得它们被广泛地应用于临床治疗_3_4_。1．1．2实

5、验动物和主要药品试剂雌性昆明对于长期服用地塞米松(dexamethasone，DXM)这(KM)小鼠12只(用于弓形虫RH株的增殖)和SD类糖皮质激素药物的患者突发急性弓形虫病的病例大鼠24只(用于腹腔巨噬细胞的提取)，购自湖南斯时有报道(in弓形虫脑膜炎、弓形虫肺炎等)，对病人莱克景达实验动物中心；地塞米松磷酸钠注射液，针造成严重的危害甚至死亡l_5J。剂，购自江西赣南制药厂；瑞一吉染色液购自安徽安巨噬细胞是机体免疫系统的重要成员，在固有科生物工程有限公司；Trizol试剂、dNTP和rTaq免疫和适应性免

6、疫中均扮演着极其重要的角色，在宿主对弓形虫感染的免疫应答过程中，巨噬细胞与DNA酶等均购自宝生物工程(大连)有限公司；大鼠弓形虫在细胞和分子水平的相互作用决定着弓形虫TNF—a、IFN一和IL一2ELISA检测试盒购自深圳晶在宿主体内的感染进程和结果[7]。此外，巨噬细胞美生物有限公司。分泌的一系列细胞因子激活细胞免疫和体液免疫，1．2方法也进一步影响弓形虫在宿主体内的散播]。1．2．1大鼠腹腔巨噬细胞的制备和培养大鼠肌为此，初步探讨地塞米松对大鼠腹腔巨噬细胞肉注射地塞米松(1．5mg／kg)，同时设空白对照

7、组感染弓形虫的影响以及与弓形虫感染免疫密切相关(生理盐水注射)，连续处理6d后，进行腹腔巨噬细收稿日期：2013—08—21基金项目：江西省教育厅科技项目(GJJ12624)；九江学院博士科研启动项目(8870909)作者简介：汪涛(1979-)，男，湖北天门人，博士，主要从事弓形虫感染与宿主相关分子机制研究。*通讯作者30动物医学进展2014年第35卷第7期(总第253期)胞的分离和培养，方法主要参考文献E9]。大鼠断颈泡2min；在超净台内1500r／min注射5mL预冷处死，用750mL／L酒精浸泡5r

8、ain，在超净工作台的D—Hanks液到腹腔，轻柔腹部，抽取腹水，中将大鼠腹部毛皮剪开，用注射器向腹腔注射预冷1500r／min离心5min，取上清置于另外一个离心的D—Hanks液10mL，轻揉其腹部3min，抽取腹管，2000r／min离心8min，弃去上清，用RPMI水，放入灭菌的离心管中，在1500r／min离心1640培养液重悬，显微镜镜检速殖子纯度；血球计10min，弃去上清，用台盼蓝不