不同分枝杆菌侵染对巨噬细胞免疫相关基因及micrornas表达的影响

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1、分类号：Q7单位代码：10193密级：公开学号：2012210硕士学位论文不同分枝杆菌侵染对巨噬细胞免疫相关基因及microRNAs表达的影响Effectsofmacrophageinfectedbydifferentkindsofmycobacteriaontheexpressionofimmuno-relatedgenesandmicroRNAs作者姓名：李金妹学位类别：理学硕士专业名称：生物化学与分子生物学研究方向：免疫生物化学指导教师：张林波教授所在学院：生命科学学院二〇一五年五月独创性声明本人郑

2、重声明：所呈交的学位论文是本人在导师指导下，独立进行研究所取得的成果。尽我所知，除文中特别加以标注和致谢所列内容外，论文中不包含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得吉林农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。本学位论文所有内容若有不实之处，本人愿意承担一切相关法律责任和后果。学位论文作者签名：签字日期：年月日关于学位论文使用授权的声明1、本人完全了解吉林农业大学有关保留和使用学位论文的规定，即：研

3、究生在校攻读学位期间所完成的论文及相关成果的知识产权属吉林农业大学所有，并同意将本论文的版权授权给吉林农业大学，学校有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。2、本人（同意/不同意，务必打印后填写）吉林农业大学将本论文版权授权给不同媒体进行电子出版、多媒体出版、网络出版以及其他形式出版（涉密学位论文解密后应遵守此协议）。3、本人声明毕业后若发表在攻读研究生学位期间完成的论文及相关的学术成果，必须以吉林农业大学作为第一署名单位。学位论文作者签

4、名：签字日期：年月日指导教师签名：签字日期：年月摘要目的：结核病是结核分枝杆菌感染人体后引起的慢性感染性疾病。在结核病感染过程中，结核分枝杆菌会被巨噬细胞吞噬，并在其中存活、增殖，最终导致巨噬细胞的凋亡，进而引发结核病。可见，若要更好地预防和治疗结核病，就需要更深入的研究结核病的发病机制。本研究选取了与炎症作用相关的免疫基因及与其调控相关的microRNAs，通过观察巨噬细胞感染不同毒力的分枝杆菌后它们表达量的变化情况，探讨分枝杆菌的感染机制及不同毒力的分枝杆菌与侵染的关系，为进一步探究结核分枝杆菌与巨噬

5、细胞的相互作用奠定基础。方法：本研究选用诱导分化的THP-1巨噬细胞，构建体外侵染模型，三种分枝杆菌H37Rv、H37Ra和BCG分别感染巨噬细胞12h、24h和36h后，收集细胞的总RNA并反转录成cDNA，采用实时荧光定量PCR的方法检测免疫相关基因IL-1、IL6R、RAB6B和TLR4的变化。根据预测miRNA靶基因的相关数据库筛选出有调控关系的三种miRNAs，即microRNA-21、microRNA-155和microRNA-29a，将收集的总RNA中miRNAs部分采用一步加尾法进行反转录

6、成为cDNA，同样采用实时荧光定量PCR的方法检测它们表达量的变化情况。结果：1.H37Rv、H37Ra和BCG感染THP-1巨噬细胞12h,24h,36h后，通过Real-timePCR的方法检测到：IL-1和THR4表达量全部上调；RAB6B表达量全部下调；H37Rv感染组在处理12h时，IL6R表达量下调（P＜0.05），在感染后期表达量出现上调；并且在BCG感染组在处理12h时IL6R表达量显著上调（P＜0.05）。2.实时荧光定量PCR检测到，三种分枝杆菌处理组在12h、24h和36h收集的样品

7、中，除12hBCG感染处理组microRNA-21下调以外，microRNA-21、microRNA-155和microRNA-29a表达量全部上调。BCG感染组在处理36h时，miRNA-21表达量显著上调（P＜0.05）；H37Ra感染组处理24h时，miRNA-21和miRNA-29a表达量显著上调（P＜0.05）。结论：三种分枝杆菌H37Rv、H37Ra和BCG侵染巨噬细胞引起了免疫相关基因表达量发生变化；与目的基因相关的microRNA-21、microRNA-155和microRNA-29a的

8、表达量均上调，除12hBCG感染处理组microRNA-21下调以外。关键词：分枝杆菌；巨噬细胞；实时荧光定量；miRNAⅠAbstractObjective:Tuberculosis(TB)isachronicinfectiousdiseaseswhichinducedbyMycobacteriumtuberculosis(Mtb).Duringthetuberculosisinfection,Mtbwouldbephago