广州管圆线虫感染balbc小鼠脾脏t淋巴细胞亚群和血清抗体的变化

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1、广州医学院硕士学位论文广州管圆线虫感染BALB/c小鼠脾脏T淋巴细胞亚群和血清抗体的变化AlterationofTcellsubtypesinspleenandantibodiesofseruminmiceinfectedbyAngiostrongyluscantontensis专业：免疫学硕士研究生：罗晓东导师：陈代雄教授广州医学院·广州2012年3月目录中文摘要……………………………………………………………………………1英文摘要……………………………………………………………………………4英文缩略语……………………………………………………………………

2、……8技术路线……………………………………………………………………………9前言……………………………………………………………………………10第一部分感染小鼠脾脏T淋巴细胞亚群和细胞因子的变化材料和方法……………………………………………………………………14结果…………………………………………………………………………20讨论…………………………………………………………………………26第二部分感染小鼠血清中特异性IgG抗体、IgE抗体动态变化材料和方法……………………………………………………………………29结果……………………………………………………………

3、……………32讨论…………………………………………………………………………34小结……………………………………………………………………………36参考文献……………………………………………………………………………37综述……………………………………………………………………………41附录……………………………………………………………………………50致谢……………………………………………………………………………51原创性声明…………………………………………………………………………52广州医学院硕士学位论文广州管圆线虫感染BALB/c小鼠脾脏T淋巴细胞亚群和血

4、清抗体的变化广州管圆线虫感染BALB/c小鼠脾脏T淋巴细胞亚群和血清抗体的变化专业：免疫学硕士生：罗晓东导师：陈代雄教授广州医学院病原生物学与免疫学教研室中文摘要广州管圆线虫作为一种新发传染病的病原，主要侵犯中枢神经系统，引起嗜酸性粒细胞增多性脑膜脑炎或脑膜炎(EosinophilicMeningoencephalitis,EM)。广州管圆线虫病主要流行于太平洋、印度洋某些岛屿和东南亚、中国、日本等国家；到目前为止，全世界已有超过3000例报道。了解广州管圆线虫感染后产生的免疫应答及与宿主相互作用，对于我们了解宿主抗损害作用的特点、虫体的致病机制和免疫

5、学诊断等有重要意义。但由于目前对于广州管圆线虫感染的基础免疫学研究很少，使医学界对宿主免疫应答机制和特点的了解非常有限。严重制约了广州管圆线虫防治研究工作的深入开展。而脾脏是哺乳动物最大的外周免疫器官和血源性抗原最主要的免疫应答场所，也是包括淋巴细胞在内许多免疫细胞定居区域。感染后脾脏淋巴细胞学的改变能较好地反映宿主对寄生虫免疫应答的特点，因此，本研究以BALB/c小鼠为动物模型，采用流式细胞术和酶联免疫吸附试验(ELISA)等方法对其感染广州管圆线虫后脾脏T淋巴细胞亚群及血清抗体水平的变化进行了观察。研究目的:观察小鼠感染广州管圆线虫后脾脏T淋巴细胞

6、亚群、细胞因子变化特点以及血清中特异性IgG、IgE抗体水平的动态变化。1广州医学院硕士学位论文广州管圆线虫感染BALB/c小鼠脾脏T淋巴细胞亚群和血清抗体的变化研究方法：1、模型建立：将30只BALB/c小鼠随机分成对照组、实验1组、实验2组，每组各10只鼠。从感染的褐云玛瑙螺分离广州管圆线虫第3期幼虫，经腹腔注射感染小鼠，实验1组感染20条幼虫/鼠、实验2组感染40条幼虫/鼠。2、采样和取材：分别经尾静脉或眼球采集感染前和感染后不同时间小鼠血液，经离心后收集血清。于感染后第19d及第25d前后分批剖杀(处死)小鼠，分离脾细胞，制备脾细胞悬液。经细胞

7、计数后，将制备的脾细胞悬液浓度调整为62×10/ml。3、脾细胞流式检测：取脾细胞悬液1ml，加入PMA及离子霉素(Ionomycin)于37℃，5%二氧化碳细胞培养箱培养1h，加入BFA后继续培养4h-5h，培养细胞经洗涤后加4%甲醛固定，加含通透剂Saponin的缓冲液，4℃过夜。将细胞分装入流式管中，加入相应的荧光标记单克隆抗体。流式细胞仪检测小鼠脾脏T淋巴细胞及其亚类的含量。4、脾细胞培养上清中细胞因子检测：取脾脏细胞悬液1ml，加入PMA及离子霉素，分别加入细胞培养板中，于37℃，5%二氧化碳细胞培养箱培养72h后取出并保存于-80℃。双抗夹

8、心ELISA法检测脾细胞培养上清中细胞因子IL-4和IL-17水平。5、血清特异性抗体检测：用