广州管圆线虫感染小鼠脑组织cathepsins表达变化及achtcp基因的克隆

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1、学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得直昌太堂或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名(手写)：斗j津签字日期：矽f≥年，7月2，扩日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解南昌大学有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复

2、印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权南昌大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编本学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所和中国学术期刊(光盘版)电子杂志社将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》和《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》中全文发表，并通过网络向社会公众提供信息服务。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位黻储签名(钨)：畔1疋锄签名(褐)：陋签字日期：p13年岁月w日签字日期：励f弓年于月≯g『日摘要广州管圆线虫病(Ang

3、iostrongyliasiscantonensis)是由广州管圆线虫Angiostrongyluscantonensis似c)引起的以中枢神经系统炎症为主的食源性寄生虫病。软体动物螺类，如非洲大蜗牛Achatinafulica(Ferussac，1821)、福寿螺Pomaceacanaliculata(Lamarck，1819)是彳c中间宿主、大鼠是彳c的终宿主、人和小鼠等是其非适宜宿主。人多因生食含有三期幼虫的淡水螺肉而感染。广州管圆线虫病主要在东南亚和太平洋岛屿流行。自1945年台湾首例报道之后，国内也

4、陆续出现新发病例报道，而且在浙江和北京均出现大规模爆发流行，我国卫生部于2003年将广州管圆线虫病列为新发传染病。目前，临床上广州管圆线虫病主要诊断依据包括三个方面：接触史、临床症状和ELISA检测结果。从感染患者脑脊液中检测到虫体是诊断此病的金标准，尽管此方法结果可靠，但是检出率很低，而且是侵袭性检查，因此难以普及，临床上也少见使用。实验室最常采用的诊断方法是ELISA法(检测患者血清特异性抗体)，但用于ELISA法的抗原是虫体粗抗原，不但敏感性和特异性有待提高，也无法用于疗效考核。因此，寻找具有诊断价值的

5、生物标记物对于改进和完善广州管圆线虫病的诊断方法具有重要意义。从已有的研究中不难发现，在寄生虫感染宿主过程中，宿主和寄生虫的组织蛋白酶均发挥重要作用。小鼠组织蛋白酶亚型众多，搜索Pubmed数据库可得到18种组织蛋白酶亚型，即是：CathepsinA，B，C，D，E，F，GH，J，K，L，M，O，Q，R，S，w,z。通过对有关宿主组织蛋白酶文献的分析，推测小鼠组织蛋白酶可能参与寄生虫感染所致脑炎的过程。从GenBank数据库中获得广州管圆线虫血红蛋白型半胱氨酸蛋白酶(Angiostrongyluscanton

6、ensishemoglobinase·typecysteineproteinaseGenBank号码：HQll0101．1)基因序列。研究发现虫源性组织蛋白酶与寄生虫的宿主入侵、自身保护和免疫逃避相关。本研究分两个部分：①感染BALB／c小鼠脑部组织蛋白酶各亚型的表达谱及变化规律研究；②广州管圆线虫血红蛋白型半胱氨酸蛋白酶基因的克隆。II摘要第一部分感染小鼠脑部组织蛋白酶各亚型的表达谱及其变化规律研究研究目的研究BALB／c小鼠Ac感染模型，动态观察感染BALB／c小鼠组织蛋白酶亚型的表达谱及表达谱的变化。为

7、进一步寻找到可作为诊断广州管圆线虫病的生物标记物(biomarker)提供实验基础。研究内容和方法1．在GenBank中查找小鼠不同亚型组织蛋白酶家族基因序列信息。2．通过网站https：／／www．genscript．corn／ssl-bin／app／primer，分别设计小鼠组织蛋白酶18个亚型(包括：cathepsinA，B，C，D，E，F，13lH，J，K，L，M，O，Q，RS，W，Z)的实时荧光定量PCR(Real．timePCR)引物。3．建立感染广州管圆线虫病的BALB／c小鼠动物模型，收集感染

8、不同时点(7d、14d、21d)的脑组织，用Real．timePCR检测分析小鼠感染后各种亚型基因的表达情况。研究结果1．在GenBank数据库中共发现小鼠组织蛋白酶18个亚型，包括：cathepsinA，B，C，D，E，F，GH，J，K，L，M，O，Q，R，S，w,z。2．建立感染广州管圆线虫病BALB／c小鼠模型，通过对感染过程脑组织组织蛋白酶各亚型的表达水平的检测，发现不同亚型组织蛋白酶表达呈