mscs调控脾脏cd4~+t淋巴细胞亚群治疗小鼠自身免疫性肝炎的研究

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1、分类号：R575.1学校代码：10062密级：学号：2012602679硕士学位论文MASTER’SDISSERTATION+论文题目:MSCs调控脾脏CD4T淋巴细胞亚群治疗小鼠自身免疫性肝炎的研究TITLE:ResearchonMSCsAmeliorateConAInducedAutoimmuneHepatitisviaImpactingSplenic+CD4TCellSubsets一级学科：临床医学二级学科：内科学消化系病论文作者：董魁指导教师：刘文天教授天津医科大学研究生院二〇一五年五月分类号：R575.1学校代码：10

2、062密级：学号：2012602679学位类别：科学学位专业学位学科门类：医学硕士学位论文MASTER’SDISSERTATION+论文题目:MSCs调控脾脏CD4T淋巴细胞亚群治疗小鼠自身免疫性肝炎的研究TITLE:ResearchonMSCsAmeliorateConAInducedAutoimmuneHepatitisviaImpactingSplenic+CD4TCellSubsets一级学科：临床医学二级学科：内科学消化系病论文作者：董魁指导教师：刘文天教授天津医科大学研究生院二〇一五年五月学位论文原创性声明本人郑

3、重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行研究工作取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外，论文中不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名：日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有关部门或机构送交论文，并编

4、入有关数据库。保密，在年解密后适用本授权书。本论文属于不保密。（请在相对应的方框内打“√”）学位论文作者签名：日期：年月日导师签名：日期：年月日天津医科大学硕士学位论文中文摘要目的自身免疫性肝炎（Autoimmunehepatitis,AIH）是一种病因不明的肝脏慢性炎症性疾病。临床上对AIH的治疗主要是使用糖皮质激素，其可单独使用，效果不明显的话则需要与免疫抑制剂如硫唑嘌呤联合应用，但这种治疗方案的完全缓解率并不高，且长期服药存在较多副作用，因此迫切需要寻找和探讨新的有效治疗方法。骨髓间充质干细胞(Bone-marrow-de

5、rivedmesenchymalstemcells,BMMSCs)是来源于骨髓中的一种多能干细胞，具有多方向分化的潜能及强大的免疫调节作用，大量动物实验和临床研究证实BMMSCs对多种自身免疫性疾病都有很好的治疗作用。本研究应用小鼠BMMSCs干预刀豆蛋白A（ConA）诱导的小鼠AIH进程，一方面进一步证实了BMMSCs的治疗效果，+另一方面通过分析小鼠脾脏中CD4T淋巴细胞的活化和亚群比例变化，深入探讨BMMSCs发挥免疫抑制作用治疗AIH的机制，为BMMSCs在临床上的应用提供一些可能的实验依据。方法经C57BL/6小鼠尾静

6、脉注射相应量的ConA以建立AIH模型小鼠。从三周龄C57BL/6小鼠的骨髓中体外分离培养BMMSCs并鉴定其表面标记分子和成脂成骨分化能力。C57BL/6小鼠随机分为三组：MSC治疗组，AHI模型小鼠经尾静脉注入MSCs；磷酸盐缓冲液（PBS）治疗组，AHI模型小鼠经尾静脉注入PBS以及正常对照组，每组5只。14-16小时后拉颈处死小鼠。检测外周血ALT、AST，进行肝脏knodell评分。取小鼠脾脏制成细胞悬液并用流式＋＋细胞分析术检测CD4T淋巴细胞活化比例及CD4T淋巴细胞中Treg、Th1、Th2和Th17细胞比例变化

7、情况，并计算Th17/Treg比值。ELISA检测外周血+中TNF-α、IFN-γ及IL-4细胞因子的水平。用q-PCR验证肝脏中CD4淋巴细胞亚群比例变化。应用独立样本t检验比较两组正态分布资料间的差异。I天津医科大学硕士学位论文结果1.BMMSCs表面特异性抗原CD44、CD29、Sca-1均为阳性，而CD45、CD11b、CD31为阴性,茜素红染色、油红0染色均呈阳性，均符合BMMSCs的特征。2.AIH模型小鼠的ALT、AST以及knodell评分均较正常对照组均明显升高，差异均具有统计学意义（P<0.05）。但是，MS

8、C治疗组的ALT、AST以及knodell评分均优于PBS治疗组，差异均具有统计学意义（P<0.05）。＋3.与正常对照组相比，PBS治疗组脾脏中CD4T淋巴细胞活化比例，＋CD4T淋巴细胞中Th1、Th2细胞所占比例及其外周血中细胞因子（TNF-α、IFN-γ