鼻咽癌可视化动物模型的建立

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1、密级硕士学位论文鼻咽癌可视化动物模型的建立EstablishmentofimageableanimalmodelsofNPC作者姓名：刘文斌学科专业：病理学与病理生理学学院(系、所)：中南大学肿瘤研究所指导教师：虿4指导教师：曹亚教授孙仑泉教授杨力芳副教授罗非君副教授论文答辩日期——答辩委员会主席中南大学2012年10月原创性声明IIIIIIIIlUlIlllY2423782本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究．工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或

2、证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。作者签名：～导师签名——日期：——年一月一日We'vanttobethegenerationthatwinsthe懈优ragainstclz祝c

3、eraruferufsthat"war饥"tory,w形notuntiC’vhcvtctoral,qYenotrestuntitqYehave饥W砒thecItFefoFca曙lcer．～一加本课题受如下基金资助：国家高科技研究发展计划靶向EBV-LMPl的脱氧核酶技术提高鼻咽癌放疗敏感性的深入研究批准号：2009AA022403国家自然科学基金：基于分子影像的鼻咽癌可视化模型在肿瘤转移研究中的应用批准号：81071755刘文斌硕上学位论文中文摘要摘要分子影像学可实现在活体生物内细胞、基因和分子水平的生理或病理过程的实时动态无创成像，其中光学成像技术

4、中的荧光技术和生物发光技术发展迅速，已广泛应用于各类肿瘤可视化动物模型中，为研究活体内肿瘤细胞与其周围环境相互作用过程，提供了一种全新的监测方法，为更清晰和深入地了解肿瘤的发生、发展及侵袭转移提供了良好的平台。鼻咽癌(NPC)是东南亚、特别是我国南方数省常见的恶性肿瘤，作为一种有着鲜明特点的头颈部肿瘤，其呈低分化，恶性程度高，早期即可出现颈部淋巴结转移。建立人鼻咽癌可视化动物模型，能促进对鼻咽癌分子机制及诊断治疗的深入研究。首先，我们采用脂质体法将荧光蛋白和荧光素酶基因表达质粒(pEGFP—N1、PGL3一Control、Luc—DsRed2)导入人鼻咽癌细胞株中(5—8F、6-10

5、B、CNEl一LMPl、C666-1)，利用G418或潮霉素进行压力筛选。经过20多天的筛选，我们挑取单独稳定表达荧光蛋白、单独稳定表达荧光素酶及同时稳定表达荧光蛋白和荧光素酶的亚克隆细胞株。其中具代表性的细胞株有：单独稳定表达绿色荧光蛋白的5—8F—GFP—F细胞株、单独稳定表达荧光素酶的5—8F～Luc—Z、同时表达绿色荧光蛋白和荧光素酶的5—8F—Luc—GFP—M及同时表达红色荧光蛋白和荧光素酶的CNEl一LMPl一Luc—DsRed2一E细胞株。接着，我们分别利用上述4株细胞，通过皮下接种技术及裸鼠鼻咽原位接种技术，刘文斌硕士学位论文中文摘要分别建立了裸鼠皮下移植瘤和裸鼠鼻

6、咽原位移植瘤可视化动物模型。结果证实：5—8F—GFP—F细胞株和5—8F—Luc—Z细胞株在裸鼠皮下和鼻咽部均具有较好的成瘤能力，并能稳定表达目的基因绿色荧光蛋白或者荧光素酶。在精诺真IVISLuminaII成像系统下，两株细胞都分别成功的建立了裸鼠皮下移植瘤及鼻咽原位移植瘤可视化动物模型。5—8F—GFP-F细胞株稳定表达绿色荧光蛋白，皮下移植瘤荧光信号定位清晰，能准确的反映皮下肿瘤体积大小及生长情况；与之相对应的鼻咽原位移植瘤可视化动物模型中，则需将裸鼠口腔打开，才能够采集到荧光信号，从而实现对鼻咽原位肿瘤的实时、动态监测，这可能与裸鼠鼻咽腔周围解剖结构复杂及GFP深层组织穿透

7、能力有限等因素有关。此外，裸鼠毛发等存在自发荧光干扰信号，这些因素，在一定程度上影响了GFP的适用范围。在5—8F—Luc—Z细胞株建立的可视化动物模型中，腹腔注射荧光素酶底物D-Luciferin后，无论是裸鼠皮下移植瘤还是鼻咽原位移植瘤，均能采集到很强的荧光信号，定位准确、清晰、亦可实时、动态监测肿瘤的生长情况。与GFP相比，荧光素酶灵敏度更高、深层组织穿透能力更强、几乎无干扰背景，其建立的鼻咽癌可视化动物模型具有其独特之处。与此同时，为结合GFP和L