大白菜端粒相关序列的克隆及不同染色体fish标记的建立

《大白菜端粒相关序列的克隆及不同染色体fish标记的建立》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、河北农业大学硕士学位论文大白菜端粒相关序列的克隆及不同染色体FISH标记的建立姓名：李九欢申请学位级别：硕士专业：蔬菜学指导教师：申书兴；轩淑欣20120602摘要IHHIIllUllllUIIIIIlllllllllIY2143683重复序列是真核生物基因组的一个重要组成部分，不仅对维持染色体的空间结构、基因的表达调控、遗传重组等都具有重要作用，而且串联重复的DNA簇往往具有种属甚至染色体的特异性。因此，克隆和分析重复序列是研究一个真核生物基因组的有效手段。大白菜(BrassicacampestrisL．ss

2、p．pekinensis)是十字花科芸薹属(Brassica)中最重要的蔬菜作物之一，属二倍体物种。此外，大白菜为小染色体物种，且非同源染色体形态相似。建立有效的染色体识别方法是进行核型分析和细胞遗传学研究的重要前提。但目前为止，利用有丝分裂中期染色体，基于rDNA为探针的FISH核型分析，可把大白菜10条染色体中的6条准确区分出，但仍有4条染色体难以识别。基于此，本研究以拟南芥重复序列为引物，以大白菜自交系‘85．1’基因组DNA为模板进行PCR扩增，对大白菜端粒相关序列进行了克隆和测序分析；并以锚定大白菜不

3、同染色体的BAC克隆为探针，在大白菜中期染色体进行FISH，结合45SrDNA、5SrDNA及着丝粒重复探针的FISH结果，构建了精确识别大白菜不同染色体的FISH标记核型图。主要研究结果如下：1．以拟南芥的端粒重复序列(TTTAGGG)3为引物，在大白菜中扩增并克隆了一个344bp的DNA片段。序列分析和比对表明，该序列为端粒相关序列(TAS)，位于大白菜2号染色体的近末端，该序列不仅含有拟南芥类型端粒重复单元，还含有其他生物的端粒重复单元。2．5SrDNA探针在大白菜染色体上共检测到了lO个杂交信号，分别位

4、于1—3号、5号染色体长臂的近着丝点区域和10号染色体的短臂末端；45SrDNA探针在大白菜染色体上同样检测到了10个杂交信号，但所位于的染色体及部位有所不同，分别位于1～5号染色体长臂近着丝点区域。3．大白菜CentBrl着丝粒重复探针在大白菜中期染色体上共检测到了16个杂交信号，分别位于1号、3号、4号、6～10号染色体的着丝点区域；CentBr2着丝粒重复探针探针在大白菜10对染色体上共检测到了4个杂交信号，分别位于第2对染色体长臂近着丝点处和第5对染色体长臂的末端。4．除A1连锁群外，其他9个连锁群筛出

5、的BAC克隆分别在大白菜9对同源染色体上各出现了1对杂交信号，确定了大白菜染色体和连锁群的对应关系，其中A2～A10连锁群分别对应于染色体6号、2号、9号、5号、4号、7号、8号、1号和10号，建立了一个基于rDNA、CentBrl、CentBr2和染色体特异BAC克隆FISH标记的染色体核型模式图。关键词：大白菜；端粒相关序列；FISH；BAC克隆；染色体核型CloningofTelomereAssociatedSequenceandEstablishmentofChromosomeSpecificFISHM

6、arkersinChineseCabbageAuthor：LiJiuhuanMajor：OlericultureTutor：ShenShuxingXuanShuxin(CollegeofHorticulture，AgriculturalUniversityofHebei，Baoding，071001，China)AbstractRepeatsequenceisoneoftheimportantcomponentsineukaryoticgenomes．Itisnotonlyimportanttomaintain

7、chromosomestructureinspace．theexpressionregulationofgenesandgeneticrecombinations，butalsotandemrepeatDNAclusteroftenhasaspecificityofgenus，speciesoreventhechromosome．Thusthecloningandanalysisofrepeatsequenceareeffectivemeanstoresearcheukaryoticgenome。Chinese

8、cabbageisoneofthemostimportantvegetablecropsincruciferousBrassicadiploidspecies．Inaddition，thechromosomeofChinesecabbageiSsmall．andtheformnonhomologouschromosomeiSsimilar．Establishmentofaneffect