大白菜连锁群特异BAC克隆的筛选及结球甘蓝—大白菜1号、4号异附加系FISH分析

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1、分类号：S笪垒密级：公珏单位代码：!嫂墨鱼学号：2鲤墨兰三垒大白菜连锁群特异BAC克隆的筛选及结球甘蓝一大白菜1号、4号异附加系FISH分析Screeningoflinkagegroup-specificBACclonesinChinesecabbageandFISHanalysisinCabbage．．Chinesecabbagemonosomicalienadditionlines1撑and4撑学位申请人：李玉玺指导教师：申书兴教授轩淑欣副研究员学科专业：蔬菜学学位类别：农学硕士授予单位：河北农业大学答辩日期：二。一一年六月四日独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进

2、行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得塑韭盛些盘鲎或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。J挎学位论文作者签名：驾王殳签字日期：沙『f年f月箩日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解塑些壅些盘堂有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权塑兰鱼盔些盘鲎可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手

3、段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名：莺上互导师签名：婶妫．．1签字日期：弘I7年6月y日签字日期：v11年6月石日学位论文作者毕业后去向：工作单位：通讯地址：电话：邮编：摘要珊Ilrrlf11IllllitI[1111Ill＼1897195大白菜(BrassicacampestrisL．ssp．pekinensis)和结球甘蓝(Brassicaoleraceavar．capitataL．)是十字花科芸薹属重要的蔬菜作物，也是研究芸薹属A、C基因组起源、演化以及亲缘关系的重要材料。由于大白菜和结球甘蓝均属小染色体物种，相邻染色体形态又极为相似，不

4、同染色体的识别存在很大困难。大白菜BAC文库的构建，为利用BAC．FISH技术鉴别结球甘蓝背景中的大白菜染色体提供了平台。基于此，本研究利用大白菜不同连锁群的SSR标记筛选大白菜BAC文库，并用筛选出的部分BAC克隆做探针在大白菜染色体上进行了BAC．FISH技术体系的初步探讨。同时，利用25SrDNA．FISH技术，分析结球甘蓝一大白菜1号、4号单体异附加系染色体上25SrDNA杂交信号分布及其在减数分裂过程中行为，揭示大白菜1号、4号染色体与结球甘蓝染色体的亲缘关系。主要研究结果如下：1．以50个一级混合池为模板，利用大白菜连锁群上特异SSR引物进行PCR扩增，A05、A06、A0

5、8、AIO连锁群共筛到了18个阳性单克隆。其中，A05引物ENAl7筛到了1个单克隆，引物ENAl0筛到1个单克隆；A06引物ENAl9筛到3个单克隆；A08引物BRMS．033筛到了6个单克隆；AIO引物ENAl8筛到了1个单克隆，B036L21．2筛到了6个单克隆。2．探讨了FAD的浓度、ssDNA的浓度对BAC—FISH杂交效果的影响，初步认为30％FAD、10％DS、2×SSC、探针1斗g、1p∥止ssDNA，得到的背景非特异性信号较少，其中91M1l单克隆获得杂交信号，97D24，91Mll克隆混合标记作为探针得到信号，91池M行混合克隆标记作为探针得到信号。3．对结球甘蓝—

6、大白菜1号、4号单体异附加系进行了田间生殖生长时期性状调查。结果表明：与二倍体甘蓝亲本一样，CAl和CA4的生殖生长时期植株长势、分枝能力均非常强，叶片形状均为卵圆形，可育；但二者在植株高度、分枝角度、花蕾和花瓣大小、形状上表现出很大差异，C～植株稍矮，花蕾为钝圆形，花浅黄色，花瓣平展，侧枝开展角度大；CAl花蕾瘦长、花色黄色，花瓣边缘呈微皱与亲本相同，侧枝开展角度较小，株型紧凑。4．25SrDNA在CAl有丝分裂中期染色体上检出了5个杂交信号，其中4个信号位于结球甘蓝5号，9号染色体上，1个信号位于附加的1号大白菜染色体上；减数分裂终变期细胞中染色体多以9个二价体和1个单价体的形式存

7、在，中期I大部分细胞中染色体均能正常排列在赤道板上。后期I染色体基本以10／9方式分离，后期II基本上以10⋯9109形式分离，个别细胞中出现后期I染色单体提前解离及后期II染色体不同步分离等异常现象。5．25SrDNA在C～有丝分裂中期染色体上检出了5个杂交信号，其中4个信号位于结球甘蓝5号，9号染色体上，1个信号位于附加的4号大白菜染色体上；减数分裂终变期染色体的构型表现出多样性，有二价体、三价体、单价体和拟多价体。中期I单价体和二价体均排