离体胚培养获得大白菜结球甘蓝异源三倍体及其生殖特性研究

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1、河北农业大学硕士学位论文离体胚培养获得大白菜-结球甘蓝异源三倍体及其生殖特性研究姓名：顾爱侠申请学位级别：硕士专业：蔬菜学指导教师：申书兴20050601摘要为创制大白菜一结球甘蓝异附加系、异代换系、易位系，利用四倍体大白菜(AAAA，2n=4x=40)和二倍体结球甘蓝(CC，2n=2x=18)杂交，采用蕾期去雄授粉，子房培养结合胚珠培养的方法，获得了大白菜和结球甘蓝的异源三倍体杂交种。并对该杂种的形态学、细胞学及其生殖特性进行了研究，为异附加系、异代换系、易位系的创制提供了物质和理论基础。初步探讨了芸薹属A、C

2、基因组染色体的亲缘关系，并摸索了芸纂属A、C基因组原位杂交的技术，为进一步研究芸薹属A、C基因组组成、起源、演化奠定了基础。研究结果表明：1四倍体大白菜与二倍体结球甘蓝杂交时，以四倍体大白菜为母本时有利于授粉受精，且受精前的不亲和不是种间杂交障碍的主要原因，而主要是由于受精后的胚胎4：能正常发育。子房培养结合胚珠培养克服了胚的天亡，获得了异源三倍体杂交种。改良White培养基适宜子房培养，它的平均每角果成活胚珠率为14．1％。授粉后6d为子房培养的最佳时期，它的平均每角果成活胚珠率为28％。子房培养28d后进行胚

3、珠培养，改良Hiidebrandt培养基适宜胚珠培养，其胚珠成活率达80％。2该杂交种总体形态偏近于白菜，但基生叶的叶柄有纵向排列的4～6对翅状小叶，生长势极强，株商(开花期)达2m；根尖染色体数目观察2n=29。3对其生殖特性的研究表明：①减数分裂前期I，来源于大白菜和结球甘蓝的染色体交互在一起形成两个没有明显分离的染色体区域，出现高频率的三价体甚至是四价体，说明大白菜与结球甘蓝具有较强的同源性；在减数分裂中期l大多数染色体排列于赤道板上，少数游离于赤道板外；后期I有13—16、14—15、14—2．13，12

4、．2．15等多种分离方式；后期II有12—1—12．16．2．16，13．2．13．14．2．14，14．14．15．15，16—16—12．1—13等多种分离方式，形成配子的多样性为创制整套的异附加系提供了可能。②花粉整齐度与花粉生活力存在显著的正相关关系，花粉生活力与结籽率里显著的正相关关系：异源三倍体的花粉量、花粉生活力极显著的低于四倍体大白菜和二倍体结球甘蓝：异源三倍体的花粉整齐度极显著的低于二倍体甘蓝的花粉整齐度。不同母本杂交组合的杂交种与四倍体大白菜花粉整齐度的显著性差异是不一致的。③异源三倍体杂种与

5、二倍体大白菜回交的平均结籽率为2．34％。4采用改良SDS法提取的大白菜和结球甘蓝基因组DNA量、纯度、分子量都较高；煮沸法剪切基因组DNA简单易行，具有可重复性。对于大白菜和结球甘蓝DNA煮沸70rain时，DNA片段主要集中在200．500bp，适于基因组原位杂交中用做封阻；采用切刻平移法标记大白菜和结球甘蓝基因组DNA时，模板采用未打断的基因组DNA，模板量O．5“g／10ul，标记170min时的效率最高。关键词：大白菜：结球甘蓝：异源三倍体；离体培养：生殖特性；探针标记AllotrlploidHybri

6、dsObtainedfromInterspeciflcHybridizationbetweenChineseCabbageandCabbageandtheResearchonReproductiveCharactersMaster：GuAixiaTutor：ShenShuxingMajor：VegetableStudyfield：Biotechnology&GeneticBreedinginVegetable(CollegeofHorticulture，AgricultureUniversityofHebei．B

7、aoding，China07100I)AbstractAllotriploidhybrids(2n=3x=29，AAC)wereproducedbycrossingtetraploidChinesccabbage(BrassicacampestrisL．ssp．pekinensisAAAA，2n=4x=40)anddiploidcabbage(占．oleracea1栅capitataL．CC，2n=2x=l8)usingoveryandovuleculturemethod，whichwillbeusedforco

8、nstructingChinesecabbage—cabbageadditionlines．substitutionlincsandtranslocationlines．Themorphology,cytology．andpollencharactersoftheallotriploidhybridswerestudied．whichprovidedtheoreticba