结球甘蓝离体叶片不定芽的再生研究.pdf

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1、■澎江右J-：学2014年第1期文献著录格式：黄小云，陶鹏，王五宏，等．结球甘蓝离体叶片不定芽的再生研究[J]．浙江农业科学，2014(1)：34—38结球甘蓝离体叶片不定芽的再生研究黄小云一，陶鹏，王五宏。，李必元，岳智臣，雷娟利，钟新民(1．浙江省农业科学院蔬菜研究所，浙江杭州310021；2．南京农业大学园艺学院，江苏南京210095)摘要：以结球甘蓝强力50组培苗叶片为外植体，研究不同激素配比、苗龄对其不定芽再生的影响。结果表明，在不含任何激素以及单独添加不同浓度的6-BA或NAA的MS培养基上，均不能诱导

2、外植体不定芽的分化；结球甘蓝离体叶片不定芽在Ms+6一BA2mg·L～+NAA0．80mg·L分化培养基上再生频率最高，为79．86％，最适宜的苗龄为8d；外植体在生根培养基1／2MS+0．30mg·LNAA中，不定芽的生根效果好，生根率达100．0％，且根系生长健壮。关键词：结球甘蓝；不同激素配比；叶片；离体培养中图分类号：S635．1文献标志码：A文章编号：0528．9017(2014)014)034—04结球甘蓝(BrassicaoleraceaL．vat．capitata1．2方法L．)是十字花科芸薹属植物

3、，是我国重要的蔬菜1．2．1无菌苗培养作物之一。近年来采用转基因技术将目的基因导入选取籽粒饱满、大小均一的甘蓝种子，用清水结球甘蓝，已成为培育抗逆新品种的一种新手段，冲洗干净，置于75％的酒精中浸泡30s，用0．1％而建立稳定可靠的高效离体再生体系是利用基因工的HgC1，表面消毒5min，最后用无菌水冲洗4次，程和其他技术育种的基础。在结球甘蓝离体培养研再用灭菌滤纸吸去种子表面的水分，接种于无激素究中，以下胚轴作为外植体的研究最多¨，且获的MS基本培养基(蔗糖30g·L+琼脂9g·得高效高频再生体系。叶绿体转基因植

4、物作为一种L～，pH值5．8)上。于(25±2)℃、光照强度新型生物反应器，具有外源蛋白表达量高和环境安1800lx，16h光／8h暗的光周期条件下培养无全性好等优点71，而叶片作为叶绿体转基因植物菌苗。最理想的外植体，研究其离体再生具有重要意义。1．2．2不同激素组合试验本试验以结球甘蓝强力50(简称QL50)为材料，试验2种激素的不同组合，6．苄氨基腺嘌呤研究了不同激素配比、苗龄对离体子叶不定芽再生(6-BA)浓度为0，1，2，3，4mg·L～，萘乙酸的影响，以期建立高效的植株再生体系，为今后通(NAA)浓度为

5、0，0．02，0．04，0．20，0．40，过叶绿体基因组遗传转化获取预期优良性状的结球0．80mg·L一，进行完全随机组合。在材料苗长约甘蓝创造条件，并为进一步有效地开展结球甘蓝叶7cm，切取0．3cm×0．3cm的叶片放入加有不同绿体基因工程的研究奠定基础。现将有关结果报道激素组合的MS分化培养基中。用培养皿进行培如下。养，每皿接种30个外植体，重复3次。培养20d，观察不定芽的分化情况，30d后统计出芽情况。1材料与方法1．2．3苗龄试验1．1材料在筛选出来的出芽较好的培养基上，取7，8，供试材料为结球甘蓝Q

6、L50，由浙江省农业科9，10，11，12d苗龄的外植体接种。培养30—学院蔬菜研究所提供，取其无菌实生苗叶片为外35d，统计不定芽分化率。植体。t．2．4不定芽生根与植株移栽收稿日期：2013-08．22基金项目：浙江省农业新品种选育重大科技专项(2012C12903-6—2)；浙江省博士后科研项目(Bsh1202084)；浙江省蔬菜产业科技创新团队项目(2009R50026)作者简介：黄小云(1989一)，女，湖北孝感人，硕士，主要从事蔬菜作物遗传育种研究工作。E-mail：yunxiaohuangl107@1

7、26．corn。通信作者：钟新民，E·mail：zxmlly@hotmail．com。黄小云，等：结球甘蓝离体叶片不定芽的再生研究_■当分化培养基中的不定芽长到1．5～2．5crtl其中3mg·L6-BA膨大最弱，但是处理10和处理时，切取后接种至含不同浓度生长素的生根培养基15即在6·BA浓度为1，2mg·L的处理比浓度为(1／2MS+0．30mg·LNAA，1／2MS+0．50mg·3mg·L的稍弱；接种20d后，处理10和处理l5LNAA)上直接诱导生根。待芽基部形成大量的已开始出芽，大部分不定芽于接种后30

8、～35d产毛根后，打开培养瓶口，炼苗4—5d后取出小植生，接种45d后仍有少数不定芽的产生。由表1中株，洗净根部，移栽到基质中，一周后观察其成活可知，在MS培养基上单独添加6一BA或NAA任何率和生长状况。一种物质，甘蓝叶片均不能再生出不定芽，在不添1．3不定芽再生频率与生根率的计算加任何激素的MS培养基上，也不能再生不定芽，不定芽再生频率／％=(再生不定芽