南果梨叶片离体培养的高效再生体系.pdf

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1、一44一江苏农业科学2014年第42卷第3期孙俊．南果梨叶片离体培养的高效再生体系[J]．江苏农业科学，2014，42(3)：4_4—46南果梨叶片离体培养的高效再生体系孙俊(辽宁省经济林研究所，辽宁大连116031)摘要：为探索一种南果梨叶片离体培养高效再生的方法，以南国梨离体培养试管苗叶片为材料，在MS基本培养基中添加6一BA、NAA、IAA进行离体培养，系统地研究植物生长调节物质浓度、苗龄、不同部位叶片、接种方向、温度、pH值及光照强度对南国梨叶片离体培养再生的影响。结果表明，MS+5mg／L6一BA+0．2mg／LNAA+7g／L琼脂+30g／L蔗糖为南国梨

2、叶片再生芽诱导的适宜培养基，诱导率最高，为46．1％；选择25—35d苗龄叶片、近叶柄处远轴面向上叶片可获得高再生频率；南果梨叶片离体再生的适宜条件为：温度(25±2)oC，pH值为5．8—6．4，高光照强度。关键词：南果梨；叶片再生；离体培养；影响因素中图分类号：$661．204．3文献标志码：A文章编号：1002—1302(2014)03—0044—03南果梨(Pyrusussuriens~Maxim．)属于蔷薇科(Rosaceae)将其放在无菌滤纸上，然后用解剖刀在叶片背面(远轴面)垂梨亚科(Pomaceae)梨属(PyrusL．)植物⋯，是秋子梨(Pyrus

3、直中脉横划3刀，但不要完全切断叶片的上表皮。叶片再生ussuriens~Maxim．)中优良的地方品种之一。该品种果实芽诱导的基本培养基为MS培养基，不同激素组合见表1，附色泽鲜艳、果肉细腻、爽口多汁，风味香浓，深受人们欢迎，市加蔗糖30g／L，pH值5．8。培养温度为(25±2)oC，每天光场发展前景十分广阔。但南国梨果实成熟集中，不耐储运，照8～10h，光照强度2500～3000lx。叶片接种后50d，调柜台寿命短，限制了南国梨的发展。常规育种过程相对较慢，查叶片再生效率和再生芽数。难以解决此问题。随着农业生物技术的发展，通过基因工程技1．2．2试验叶片的苗龄对

4、不定芽诱导的影响采用离体培术加快南国梨耐储品种的培育将成为解决南国梨保鲜的一条养25、35、60、90、120d组培苗叶片进行叶片苗龄对再生频率新捷径。而在转基因研究中，成功的基因转化首先依赖于高效的影响研究。选取上部1～3叶位幼嫩叶片，垂直主脉横切2稳定的再生系统。原生质体培养与叶片培养是目前运用最广刀，将叶块近轴面向下接种于分化培养基上。泛的转基因植株再生系统。叶圆盘法因能避免对原生质体1．2．3叶片种方方向对叶片再生不定芽的影响设叶片远的繁琐操作而成为基因转移中最常用的方法。梨属植物叶轴面和近轴面接触培养基2种接种方法处理，接种于MS+片的再生已有报道，但未有

5、南果梨叶片离体培养再生体5mg／L6一BA+0．2mg／LNAA+7L琼脂+30g／L蔗糖培系建立及其影响因素研究的报道。本研究以南果梨试管苗叶养基上，对比观察不定芽的诱导情况。培养及调查方法同片为试材，建立高频稳定的叶片离体再生体系为目的，以MS“1．2．1”部分。基本培养基添加6一BA、NAA、IAA进行离体培养，系统地进1．2．4叶片不同部位对叶片再生不定芽的影响取继代培行植物生长调节物质浓度、苗龄、不同部位叶片、接种方向、温养35d的无菌苗叶片。在叶片的基部、中部和尖部垂直于中度、pH值及光照强度对南国梨叶片离体培养再生影响的研脉各切1刀，接种在筛选出的含适

6、宜激素的不定芽诱导培养究。本试验旨在研究叶片离体再生不定芽的影响因素，建立基(MS+5mg／L6一BA+0．2mg／LNAA+7g／L琼脂+简单、快速、高效的叶片离体再生体系，从而为进一步利用基30g／L蔗糖)上，每瓶放3张叶片，重复8次。培养及调查方因工程技术对南国梨进行遗传改良提供理论依据。法同“1．2．1”部分。上述试验均为每瓶接种9个叶块(3张叶)，随机区组试1材料与方法验设计，每处理10瓶，重复3次。试验再生培养基为MS+1．1材料5mg／L6一BA+0．2mg／LNAA+7g／L琼脂+3Og／L蔗糖。材料为采自辽宁省鞍山市的大红南果的一年生枝条，在1．3

7、结果调查与统计分析无菌条件下培育出的试管苗。在叶片接种30d后对不定芽的再生率和平均每个叶块1．2方法的分化不定芽数进行调查。结果用DPS统计软件进行方差1．2．1不同激素组合对叶片再生不定芽诱导的影响取继分析，百分率经反正弦转换。再生频率=再生不定芽的叶块代培养25～35d的试管苗顶部生长健壮、完全展开的幼叶，数／接种叶块数×100％；叶块平均再生芽数(个／叶块)=叶块再生不定芽总数／出芽叶块数。收稿日期：2013—11—042结果与分析基金项目：辽宁省博士基金启动项目(编号：20131051)。作者简介：孙俊(1983一)，女，辽宁大连人，博士，工程师，主要