离体培养柑桔小胚获得三倍体植株1)

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1、津传HEREDITAS(Beijing)10(6):9-111988二离体培养柑桔小胚获得三倍体植株‘’高峰张进仁吴安仁陈善春（中国农业科学院柑桔研究所，重庆）兰倍休植株因不能进行正常的减数分裂，将小粒种子洗净胶质，用。.1%升汞溶液消常产生败育的胚囊和花粉；又因柑桔属植物具毒10分钟并在无菌水中浸洗3次。在无菌操有单性结实的能力，因而人工培育三倍体植株作条件下剥去内外种皮，分别接种到各种培养已成为获得无核柑桔品种的一条重要途径。在基中。柑桔属植物中，获得三倍体主要有三条途径：（二）培养方法(1)通过胚乳离体培养诱导三倍体植株［[I>;(2)1培养基以MT培养基为基本培养基，四

2、倍体品种同二倍体品种杂交，获得三倍体[41.其配方的无机盐与MS培养基相同，但维生素(3）单胚的二倍体柑桔品种作母本进行杂交或类组成为：盐酸硫胺素10毫克／升，烟酸，毫自然授粉后，可产生一定比例的，重量为正常种克／升，盐酸毗哆素10毫克／升，肌醇100毫克／子1/6至123的小粒种子，并已确定此小粒种升；甘氨酸2毫克／升。此外，分别加人如表2子是三倍体［[2,3,8,10]。这无疑为柑桔的三倍体培育所示的各种激素和生37T活性物质。GA用0.45提供了一条简便、实用和快速的新途径。微米的微孔滤膜过滤除菌。所有培养基的蔗糖直接用小粒种子进行播种繁殖，虽然已获浓度均为5外，琼脂为0

3、.8多，pH5.8o1210C,得了一些萌发实生苗[2,3.5,103，然而由于小粒种子1.1公斤／厘米，热压灭菌20分钟。的出现率低，贮藏的养分少，萌发的根、芽很短2．培养条件培养室温度为28士20C，小小，生长速度慢等缺点〔2,31，成苗率和繁殖速度胚萌发前黑暗培养。萌发后，每日光照14小都比较低。本研究旨在用植物组织培养的方时，光强2000勒克斯（荧光灯）。法，离体培养单胚柑桔品种韦尔金桔（Citrus（三）幼苗的生长及根尖染色体观察reticulata)小粒种子去种皮后的小胚，获得高培养，天后，统计在各种培养基中小胚的成苗率的完整三倍体小植株，以克服直接播种萌发率；2周

4、后，调查其成苗率及生长情况。同繁殖法的不足。同时对其三倍体小粒种子的大时，随机抽取20株试管苗，在无菌操作条件下小及出现率也进行了研究。切取根尖后，扦插到MT十NAA(3毫克／升）培养基中，继续培养。切取的根尖经饱和对二材料和方法氯苯溶液预处理朽分钟，1:3醋酸乙醇溶液固（一）取材定1-2小时，用1N盐酸在60℃水浴中解离1986年10月中旬在本所柑桔品种资源圃约10分钟。蒸馏水清洗后，45外丙酸地衣红内采摘自然授粉后的韦尔金桔成熟果实。选取压片观察并摄影。果实中重量不到正常种子1/3且生长饱满的小粒种子，并统计小粒种子的出现率（占供试种子GaoTengetal.:，”vitr

5、oProductionofTriploid总数的百分率），测量小粒种子和正常种子的单PlantletsfromSmallEmbryosofCitrus1)张永芳和葛康同志参加了部分工作，谨此致谢。拉重、粒长和粒宽。本文于1987年7月16日收到。乡衰1小粒种子和正常种子的出现率及大小比较结果出现率单粒重粒数（％）（克）拉长（毫米）笼》粒宽（毫米）．，（一）小粒种子的大小和出现率小拉种子0.048.23士0.133.91土0.05从表1可以看出，小粒种子和正常种子的85＿8.6正常种子89991.40.1213.31+0.186.58十0。盯单粒重、粒长和粒宽等均存在着较大的差异

6、。小比率1:31:1.6T:1.7粒种子的平均单粒重仅为0.04克，为正常种子1)平均数土标准误〔S.E.)(0.12克）的1/3。其粒长和粒宽分别是正常种子的1/1.6和1/1.7（图1)。小粒种子的出现率较低，仅占供试种子总数的8.6拓。（二）小胚的萌发和生长在各种培养基上，小胚的萌发率都较高（表2)。其中以I号和11号培养基的效果最好，萌发率均达92.3多，而在III号培养基上的最低(76.9务）。由于11号培养基中小植株的茎生长迅速，非常纤细（图1,2)，一部分后期转枯死亡，所以其成苗率（69.2茄）反低于I号和IV号培养基(84.6务和76.9界）。在1号和IV号培养

7、基中的小植株，根和茎均较粗壮，生长旺盛（图1,3)。切取根尖后的20株扦插苗继续培养，天后，其中有一部分转枯死亡，另有12株在切口处又长出新根（图l,幻，并发育成完整植株。（三）小植株的染色体数鉴定20株小植株的根尖细胞染色体计数观察表明，在17个可清晰计数的分裂相细胞中，全图1离体培养柑桔小胚获得小植株为三倍体(2。一3x-27)（图l,约，未发现1．韦尔金的小粒种子（左）和正常种子；2.11号培养基中的小植株；3.1号培养基中的小植株；4．取根尖后有二倍体存在。说明用小胚离体培养的方法获