单味中药脱色及复方含药血清对体外培养人a375黑素瘤细胞黑素代谢影响的研究

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1、南方医科大学2012级硕士学位论文单味中药脱色及复方含药血清对体外培养人A375黑素瘤细胞黑素代谢影响的研究★EffectsofSingleherbsdecoloringandmedicatedserumwithcompoundChinesedrugsonmel·-aninmetabolizationinhumanA375melanomacellsinvitro宰课题来源：广东省中医药管理局基金项目(编号：2010225)专业名称学位申请人指导教师答辩委员会主席答辩委员会成员中西医结合临床刘开IJ开IJ杨柳教授杨钦河教授陈达

2、理教授杨运高教授文小敏教授李慧忠主任医师论文评阅人范瑞强教授汤岳龙教授2012年4月2日硕士学位论文lI[1llEIlllll[fllllrlll[{llllll[[1l[1Il[{fY2257328单味中药脱色及复方含药血清对人A375黑素瘤细胞酪黑素代谢影响的研究硕士研究生：刘利利指导老师：杨柳教授摘要研究背景与目的皮肤色素代谢障碍与多种体内因素和环境因素密切相关，色素障碍性疾病(如白癜风、黄褐斑)易诊而难治。随着分子生物学技术的广泛应用，有关色素代谢的研究迅猛开展。国内外学者积极探索色素代谢的机制及影响因素，阐述中药调

3、节色素代谢的作用机制，为治疗色素代谢性疾病寻找安全、有效的中药成分或方剂，对有关中药与色素的代谢方面进行了广泛的研究，但目前对其作用机理与规律仍未能得到深入的科学阐述，因此临床上缺乏较为理想治疗手段及方法。目前许多中药对酪氨酸酶活性、黑素细胞代谢的影响已经有了初步的揭示，研究的方法技术亦日益成熟。但是，大多数研究都局限于观察单味中药或复方中药的研究上，鲜有从中药色象理论的角度设计较为系统的多层次的研究，有关色象中药对黑素代谢影响与干预机理的研究尚为缺乏。吾师杨柳教授通过长期的临床探索与理论研究，在取象比类思维启示下创立了治疗

4、色素性皮肤病的中药色象理论，形成了具有鲜明特色的理论和治疗方法。认为中药颜色与色素性皮肤病的疗效有一定的相关性，并首次将这种表明药材颜色与疗效相关的现象称之为“中药色象”，将这种治疗色素病色效相关的中药，称之为“色象中药”。初步研究中药药材颜色与色素性皮肤病的疗效之间的关系，并取得了一定的成果。我们的初步研究结果和以往学者的研究表明对药材本身的颜色与药效存在一定的关系，因此对中药色象理论的进一步研究，尤其是应用现代科中文摘要学研究方法技术，对色象中药调节与干预色素代谢机理的现代分子学研究是非常有必要的。另外，白癜风作为色素脱

5、失性疾病的典型病种，临床上易诊而难治。中医药治疗白癜风具有鲜明的特色，强调证候分型与辨证论治。但目前白癜风的证候分型及方药种类繁多，缺乏统一性和标准化。此外，在临床实践中许多白癜风患者出现“无症可辨"或“少症如何辨”的情况，基本除了皮肤出现白斑以外，没有其他特殊的伴随症状。对此，吾师提出了以“祛风、活血、补肾’’为基本治则，并结合分期论治的治疗方案。基于此，本研究通过查阅大量的文献资料及临床资料，并结合临床实践经验，在以往研究的基础上，筛选出中医传统治验及现代研究表明治疗色素病有效的使用频率高的黑白两类中药共10味，以目前研

6、究技术较为成熟的酪氨酸酶、细胞增殖及黑素合成作为观察指标，研究单味中药经活性炭脱色后对体外培养的人A375黑素瘤细胞黑素代谢的影响，以及采用中药血清学的方法研究4种具有不同功效的复方含药血清对黑素代谢的影响，进一步探讨色象中药与色素代谢的相关性，为色象理论及临床辨证用药提供科学依据，为以后白癜风的辨证治疗提供实验依据，同时为中医药治疗色素病的研究提供新的思路，以有效地指导临床。方法与内容1、通过查阅大量的文献资料及临床资料，并结合临床实践经验，在以往的研究基础上，筛选出中医传统治验及现代研究表明治疗色素病有效的使用频率高的中

7、药，依据饮片的外在颜色分为黑(深色)、白(浅色)两组，每组各选5味药作为代表药，制备各单味中药水提液，取上述中药水提取液100ml，用紫光分光光度法进行测定吸光度值，采用正交试验法对每味中药的脱色工艺进行筛选，以最佳脱色条件进行脱色后取上清液过滤后备用，并用不含胎牛血清的培养基进行稀释，使药物终质量浓度为10pg／ml。n硕士学位论文2、参照医学实验动物学及中药血清学的方法，制备四种不同功效配伍的复方含药血清，并用不含胎牛血清的培养基进行稀释，使含药血清的终浓度为5％、10％、20％、30％，并以此四种浓度进行研究。3、应用

8、细胞培养学技术，将人A375黑素瘤细胞株进行体外培养。采用多巴速率氧化法测定黑白两组中药水提取液脱色前后、四种不同功效配伍的复方含药血清在不同浓度对细胞中酪氨酸酶活性的影响，采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定黑白两组中药水提取液脱色前后、四种不同功效配伍的复方含药血清在不同浓度对细胞增殖的