大黄、虫对药含药血清对原代培养人子宫肌瘤细胞增殖的影响论文

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1、大黄、虫对药含药血清对原代培养人子宫肌瘤细胞增殖的影响论文【摘要】目的观察大黄虫对药不同剂量含药血清对原代培养人子宫肌瘤细胞增殖的影响。方法原代培养并建立人子宫平滑肌瘤细胞系，采用中药血清药理学方法处理细胞，以MTT比色法检测含药血清作用于子宫肌瘤细胞12，24，48，72h的光密度值，计算细胞存活率。结果大黄虫对药含药血清可直接抑制子宫肌瘤细胞增殖。结论大黄虫对药含药血清可直接抑制子宫肌瘤细胞增殖，子宫肌瘤细胞是大黄虫对药含药血清发挥治疗作用的靶细胞。【关键词】大黄;虫;子宫肌瘤;细胞培养;含药血清Abstract：ObjectiveToo

2、bservetheeffectsofdifferentdosagesofmedicatedseraofDahuangandZhechongontheproliferationofhumanleiomyomacellsinvitro.MethodsHumanleiomyomacellspharmacologymethod.TheMTTassaycontainingDahuangandZhechongshoyomacells.ConclusionDahuangandZhechongmedicatedserumhasinhibitoryeffect

3、onproliferationofhysteromyomacells,yomacellsaretargetcells.Keyyoma;Cellculture;Medicatedserum子宫肌瘤(myomaofuterus)又称子宫平滑肌瘤(leiomyomaofuterus).freelin处理灭活补体后，用0.22μm的微孔滤膜过滤除菌分装，置-20℃冻存备用。1.2药物及试剂大黄虫对药，购自陕西中医学院金秋门诊，经本院药剂科鉴定无伪劣品。药物加水浸泡常规煎煮过滤，水浴蒸发至大、中、小剂量，每毫升含生药量分别为0.506g，0.253g，

4、0.126g，置于4℃冰箱保存备用。桂枝茯苓胶囊，连云港康缘制药有限责任公司，0.31g/粒。国药准字号210950005，产品批号060518。胰蛋白酶、DMEM培养基、新生胎牛血清、抗α-平滑肌肌动蛋白(α-Actin)、MTT、SP免疫组化试剂盒均购自第四军医大学宝泰克生物试剂有限公司。青霉素、链霉素、碳酸氢钠、二甲基亚砜(DMSO)、氯化钠、氯化钾、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、苯甲酸雌二醇、黄体酮均为第四军医大学实验动物中心309细胞培养室友情提供。1.3仪器电动玻璃匀浆机(宁波新芝科器研究所，DY-1)，电子天平(上海精科天平，Ja12

5、002)，低温高速离心机(Heraeusinstruments，Biofugefresco)，低温高速台式离心机(Heraeusinstruments，Biofugestratos)，超净工作台(汇龙仪表电子责任有限公司，SHJ系列)，电热恒温水槽(精宏实验设备有限公司，DK-600型)，可调式封闭电炉(上海浦东荣丰科学仪器有限公司)，台式离心机(Heraeusinstruments，BIOFUGEPICO)，移液枪(GILSON，200μl、10μl、1000μl)，NAPCO-5410型CO2培养箱、OLYMPUS倒置显微镜、MR5000

6、型酶标仪。一次性过滤器、培养瓶、离心管、吸管、加样枪头、微量振荡器均由第四军医大学实验动物中心细胞培养室309实验室友情提供。2方法2.1子宫肌瘤细胞的培养和鉴定子宫肌瘤标本共60例，40例由陕西省肿瘤医院妇瘤科手术提供，20例由西安市第四人民医院病理科提供。取自因子宫肌瘤而行子宫全切或肌瘤剔除术的绝经前妇女，年龄36～48岁，平均40岁。肌瘤部位为浆膜下或肌壁间，未曾接受性激素治疗。术前取得患者及家属同意，标本均经病理证实。子宫离体后立即无菌切取肌瘤组织约2.0cm×2.0cm大小，用0.01%PBS冲洗后，分别置于盛有10%DMEM+双抗

7、消毒液的消毒瓶中，1h内送进实验室。组织贴块法2原代培养，约3～4周出现致密的细胞层时取出组织块，使细胞生长融合，再用胰酶消化法2传代培养。7～10d后细胞生长成致密层时可再传代，传代细胞均为梭形细胞。选生长良好、形态均一的第3～5代细胞，α-平滑肌肌动蛋白(α-Actin)SP免疫组化法鉴定后用于实验。2.2细胞铺板培养及实验分组将第3～5代子宫肌瘤细胞消化，加20%完全DMEM培养液，调整细胞浓度为3×105/L接种于96孔培养板中，100μl/孔，每组设8个平行孔，共6组：空白对照组(无血清DMEM培养液)、细胞对照组(无药血清组，20

8、%正常血清)、阳性对照组(20%桂枝茯苓胶囊含药血清)，大黄虫对药大、中、小剂量组(20%大黄虫对药大、中、小剂量含药血清)。孵育24h细胞贴壁后，吸弃上清，加入无