低剂量化疗联合基因修饰的树突状细胞疫苗治疗肝癌的实验研究

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1、南方医科大学2009级硕士学位论文低剂量化疗联合基因修饰的树突状细胞疫苗治疗肝癌的实验研究Low--dosechemotherapycombinedwithgene·-transducteddendriticcellvaccineforHepatoce¨ularCarcinoma课题来源：广东省科技计划项目(20088030301156)专业名称学位申请人指导教师答辩委员会主席答辩委员会成员肿瘤学宋浩杰罗荣城教授杨洋郭坤元徐萌蔡开灿张军一李爱民论文评阅人徐萌教授张军一教授2012年4月25日广州硕士学位论文低剂量化疗联合基因修饰的树突状细胞疫苗治疗肝癌的实验研究硕士研究生：宋浩

2、杰指导教师：罗荣城教授杨洋教授摘要研究背景和目的原发性肝细胞癌(Hepatocellularcarcinoma,HCC)，是一种严重影响人类健康的恶性肿瘤，是全球第五位最常见恶性肿瘤，第三位最常见肿瘤相关性死亡原因。在我国每年肝癌的发病率为20．4／10万，其死亡率高居癌症死亡率的第二位。目前，手术切除是公认治疗HCC首选和最有效的治疗方法，但是大多数肝癌患者的手术切除率低，且术后复发转移率高，加上肝癌细胞对放化疗的敏感性差，肝癌患者的5年生存率仍处于极低水平，因此寻找新的治疗方法迫在眉睫。近年来，随着一些高效低毒的化疗新药陆续问世和不同机理药物的联合应用使得晚期HCC系统化疗

3、取得了新的突破。EACH等研究证明了含奥沙利铂的FOLFOX4方案系统化疗能为晚期HCC患者带来局部控制和生存获益。奥沙利铂(OXA)为第三代铂类制剂，临床疗效确切、毒副反应较小且易于控制；氟尿嘧啶(5-FU)也是临床上广泛应用的化疗药物。化疗作为一种重要的肿瘤治疗方法，在提倡足量、联合化疗的同时，化疗药物对正常组织的急性和蓄积性毒性限制了它的剂量和使用时间。而低剂量化疗(10w．dosechemotherapy)无明显化疗毒副反应，对机体免疫系统也无明显的抑制作用，反而能够提高某些效应细胞的免疫活性。同时，化疗、免疫治疗的不同作用机制使得序贯性免疫化摘要疗(sequentia

4、limmunochemotherapy)成为一种新的治疗理念。随着肿瘤免疫学和分子生物学的迅速发展，肿瘤生物治疗已成为肿瘤治疗的第四种模式，显示了良好的应用前景。肿瘤免疫学说认为，肿瘤的发生、发展与机体的免疫功能缺陷密切相关。进一步研究发现，导致此缺陷的原因在于机体对成熟DC的功能下调。肿瘤微环境中DC的抗原提呈功能受到抑制，不能进行有效的抗原提呈。树突状细胞(Dendriticcells，DCs)是目前已知的体内功能最强大的、唯一能激活初始T细胞(NaiveTcells)的专职抗原提呈细胞(APC)，在T细胞抗肿瘤免疫应答的启动、调控过程中起着关键作用。采用各种形式肿瘤抗原修

5、饰DC，然后回输体内，激活T细胞，产生强大的抗肿瘤免疫效应，从而解决因DC功能缺陷造成的肿瘤免疫逃逸。传统体外用肿瘤抗原负载DC的细胞治疗方法其缺陷在于抗原肽在DC上的存在时间短，仅能诱导有限的T细胞克隆，细胞免疫原性低等。我们前期的研究结果证实：以AAV为载体，将肿瘤抗原基因负载DC，能够上调DC表面标志CDla、HLA—DR、CD40、CDS0、CD83、CD86等的表达，诱导抗原特异性的CTL，增强其杀伤活性。以DC为基础的基因细胞免疫治疗已成为肿瘤生物治疗领域新的研究热点，其抗肿瘤机制是通过激活体内免疫系统，尤其是细胞毒T淋巴细胞特异性杀伤肿瘤细胞，而不损伤正常组织和细

6、胞。临床研究表明，树突状细胞疫苗在前列腺癌、黑色素瘤、肾癌、恶性淋巴瘤等肿瘤免疫治疗中取得了令人鼓舞的疗效。尤其是前列腺癌DC疫苗的研究，2010年4月29日，美国FDA批准了丹德里昂公司(Dendreon)生产的前列腺癌的治疗性疫苗(Provenge)上市。以DC为基础的肿瘤疫苗被认为是最具潜能的肿瘤免疫治疗手段，但是，目前DC疫苗在肝癌等大多数恶性肿瘤中只取得了有限的临床疗效。研究发现，肿瘤细胞表面可以表达多种与肿瘤免疫逃逸相关的抑制性细胞因子，如IL·10、VEGF、TGF．B、PGE2等，而且肿瘤细胞表面肿瘤抗原分子和MHC．I类分子表达下调或缺失，这些机制都会导致肿瘤

7、的免疫逃逸。重要的是，这些表型已经与肿瘤临床预后不佳密切相关。而且，DC细胞免疫治疗的目标仍然在于消除肿瘤微H硕士学位论文小转移灶，控制肿瘤的复发和转移，在肿瘤负荷高或者肿瘤免疫原性较低的条件下，疗效有限。因此，多种治疗方法尤其是传统疗法与新兴的免疫疗法的联合应用必将成为肿瘤治疗的趋势。化疗、免疫治疗的不同作用机制使得序贯性免疫化疗成为一种新的治疗理念，受到人们的关注。某些细胞毒性药物能够通过改变肿瘤微环境来调节肿瘤免疫逃逸的机制，从而促进激活CD8+CTL的活性。如何制定规范化、个体化、毒