丙泊酚急性暴露对神经干细胞发育调控基因的影响

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1、温州医学院硕士学位论文丙泊酚急性暴露对神经干细胞发育调控基因的影响姓名：李纯申请学位级别：硕士专业：麻醉学指导教师：葛仁山；连庆泉；林函2012-05-24温州医学院硕士学位论文丙泊酚急性暴露对神经干细胞发育调控基因的影响中文摘要目的观察丙泊酚急性暴露对E15大鼠大脑皮层神经干细胞发育调控基因stat3、sox2以及notchl表达的影响，探讨丙泊酚影响皮层神经干细胞发育的机制。方法1．分离E15天SD大鼠皮层进行神经干细胞原代培养。以(0．5—1)×106细胞密度接种，在含有2％B27，20ng／mlbFGF，20ng／mlEGF的DMEM／F12的培养基中培养

2、，并稳定传至第3代。用nestin细胞免疫化学染色法鉴定神经干细胞。2．将原代培养的神经干细胞随机分为2组：溶剂对照组(C)和50uM丙泊酚组(P)，分别加入DMSO和50uM丙泊酚，急性暴露6h后收集细胞。3．采用逆转录聚合酶链反应法(RT—PCR)验证待检基因，采用荧光实时定量聚合酶链反应法(Real-TimePCR)检测各组样本中Stat3、Sox2、NotchlmRNA的含量。结果1．Stat3、Sox2、Notchl在P组和C组均有表达。2．与C组比较，P组NotchlmRNA水平明显降低，差异有统计学意义(P<0．05)；Sox2和Stat3mRNA水

3、平在两组之间差异无统计学意义。结论50uM丙泊酚急性暴露6小时降低皮层神经干细胞notchlmRNA水平，不影响转录因子Sox2和Stat3的水平。关键词：丙泊酚；神经干细胞；分化；Stat3，Sox2，Notchl4温州医学院硕士学位论文TheEffectofPropofolAcuteExposureontheNeuralStemCellDevelopmentRegulationGeneABSTRACTObjective：Toobserveexpressionofdevelopmentrelatedgeneofcerebralcortexneuralstemce

4、llofE15rattreatedwithacuteexposuretopropof01．Toexplorethemechanismhowpropofolaffectsratcorticalneuralstemcelldevelopment．Methods：f1SeparatetheE15daysSDratcorticalneuralstemcellsforprimaryculture，andseedcellswithdensityof(O．5．1)×100i11DMEM／F12mediumcontaining2％B27，20ng／m1bFGFand20ng／ml

5、EGF’thenchoosethethirdgeneration．Identificationofneuralstemcellswithnestinimmtmocytochemistrystaining．(2)Primaryculturedneuralstemcellswererandomlydividedintotwogroups：thesolventcontrolgroup(C)andthe50uMpropofolgroup(P)，treatedwithDMSOor50uMpropofolrespectively．cellswerecollectedafter

6、acuteexposureto6hours．f31Thereversetranscriptasepolymerasechainreaction(RT-PCR)andreal—timefluorescencequantitativepolymerasechainreaction(Real-TimePCR)wereappliedtodetectthelevelsofStat3．Sox2．andNotchlmIⅢAineachsample．Result：Stat3，Sox2，andNotchlwereexpressedbothinthePgroupandCgroup．C

7、omparedwithgroupC，theNotchlmRNAlevelofPgroupwasdecreasedsignificantly俨<0．05)，TherewerenosignificantdifferencesofStat3andSox2mRNAlevelbetweenthetwogroups．‘Conclusion：Propofolacuteexposure(50uM，6h)reducedthecorticalneuralstemcellsnotchlmRNAlevel。ButtheexposuredidnotaffecttheStat3orSox2m

8、RNAle