不同条件co2气腹手术对裸鼠卵巢癌种植转移的影响及其机制的研究

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1、第二军医大学博士学位论文不同条件CO2气腹手术对裸鼠卵巢癌种植转移的影响及其机制的研究姓名：徐舒翔申请学位级别：博士专业：妇产科学指导教师：刘彦201205不同条件C0：气腹手术对裸鼠卵巢癌种植转移的影响及其机制的研究摘要第一部分离体环境模拟不同条件腹腔镜二氧化碳气腹对卵巢癌细胞生长增殖的影响目的：通过建立离体模拟的不同条件腹腔镜二氧化碳(C02)气腹的手术环境以研究离体环境C02气腹环境本身对人卵巢腺癌细胞株(SKOV3)细胞生长增殖的影响，从而对腹腔镜用于在体卵巢癌手术的安全性作出初步评价。方法：1、建立离体环境腹腔镜C02气腹模型。实验分5组：空白对照组、开腹对照组、恒压,3mm

2、Hg气腹手术组、恒压8mmHg气腹手术组、脉冲8mmHg气腹手术组。每组干预2小时。2、CellCountingKit一8(CCK-8)试剂盒法检测离体环境不同条件C02气腹对卵巢癌细胞生长增殖的影响。3、实时荧光定量聚合酶链反应(RealTime．PCR)法检测离体环境不同条件co：气腹对卵巢癌细胞中血管内皮生长因子．C(VEGF．C)、黏附分子CD44变异体6(CD44v6)及E钙黏连蛋白(E．cad)的基因信使核糖核酸(mRNA)表达的影响。结果：1、离体腹腔镜C02气腹环境和开腹环境对卵巢癌SKOV3细胞增殖生长都有一定的抑制作用，而且随着压力的升高，其抑制作用越明显。虽然低气

3、压(3mmHg)气腹组比开腹组对离体卵巢癌细胞生长增殖影响更小，但无明显统计学意义(P>O．05)。两种气腹机对离体卵巢癌细胞生长增殖的影响也无明显统计学意义(P>0．05)。‘2、离体腹腔镜C02气腹环境和开腹环境对卵巢癌SKOV3细胞VEGF．C、CD44v6及E．cad基因mRNA表达都有一定的抑制作用，而且随着压力的升高，其抑制作用越明显。虽然低气压(3mmHg)气腹组比开腹组对离体卵巢癌细胞生长增殖影响更小，但无明显统计学意义(P>O．05)。脉冲气腹机对离体卵巢癌细胞VEGF．C、CD44v6及E．cad基因表达的抑制作用更大，具有明显统计学意义(尸<0．05)。结论：C0

4、2气腹环境本身对卵巢癌细胞生长增殖无促进作用，可进～步用于在体实验研究。第二军医大学博士学位论文关键词：C02，腹腔镜，气腹，卵巢癌，RealTimePCR，CellCountingKit．8第二部分腹腔镜不同条件1302气腹对卵巢癌裸鼠模型预后的影响目的：以人源卵巢癌细胞构建裸鼠卵巢癌动物模型。予荷瘤裸鼠行不同条件的腹腔镜C02气腹干预，观察描绘荷瘤裸鼠生存曲线，并与开腹组对照，进一步研究探讨腹腔镜不同C02气腹条件对卵巢癌预后的影响。方法：1、通过腹腔注射稳定传代的人源SKOV3细胞建立在体的裸鼠卵巢癌模型。2、RealTime．PCR内参法检测移植接种的肿瘤遗传学种属特点。3、将

5、30只裸鼠随机分为5组：空白对照组、开腹对照组、恒压3mmHg气腹手术组、恒压8mmHg气腹手术组、脉冲8mmHg气腹手术组，每组6只。各实验组干预时间为1h；对照组不经气腹处理。干预后继续在无特定病原体环境(SPF级)自然饲养直至死亡。’结果：l、本次实验裸鼠卵巢癌模型造模成功，模型具备实体瘤和腹水瘤两者的特点。2、移植接种的裸鼠实体瘤和腹水瘤均为鼠源肿瘤。3、开腹组及不同条件C02气腹组对卵巢癌预后均存在不良影响，而且随着压力增高，这种影响更大。但开腹与低气压(3mmHg)气腹组之间无明显差异。在高气腹压力情况下(8mmHg)，脉冲气腹机比恒压气腹机对卵巢预后影响更大。结论：开腹(

6、开关术、无减瘤操作)及气腹干预(无减瘤操作)对卵巢癌预后均存在不良影响，而且随着压力增高，这种影响更大。但开腹与低气压(3mmHg)气腹组之间无明显差异。在高气腹压力情况下(8mmHg)，脉冲气腹机比恒压气腹机对卵巢预后影响更大。关键词：C02，腹腔镜，气腹，卵巢癌，裸鼠，RealTimePCR不同条件CO：气腹手术对裸鼠卵巢癌种植转移的影响及其机制的研究第三部分腹腔镜不同条件002气腹对裸鼠卵巢癌种植转移影响的机制目的t在构建裸鼠卵巢癌动物模型后，予荷瘤裸鼠行不同条件的腹腔镜C02气腹干预，通过RealTime．PCR法和ELISA法研究在体气腹环境对卵巢癌组织基因VEGF．C、CD

7、44v6和E．cad表达的mRNA和蛋白的相对情况；通过显微电镜了解腹腔镜气腹对腹膜局部的超微结构影响改变。并与开腹组对照，迸一步研究探讨腹腔镜不同C02气腹条件对卵巢癌预后影响的机制方法：1、RealtimePCR法检测不同条件C02气腹对裸鼠卵巢癌组织中VEGF．C、CD44v6及E．cad基因mRNA表达的影响2、酶联免疫法(ELISA)检测不同条件C02气腹干预术前与术后7天裸鼠卵巢癌腹水中VEGF．C、CD44v6及E．cad蛋白含量