omihtra2在口腔鳞癌组织中的表达及临床意义

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1、河北医科大学硕士学位论文Omi/HtrA2在口腔鳞癌组织中的表达及临床意义姓名：黑乃恒申请学位级别：硕士专业：口腔临床医学指导教师：陈彦平201203中文摘要0mi／HtrA2在口腔鳞癌组织中的表达及临床意义摘要目的：口腔鳞状细胞癌(简称口腔鳞癌)是发生在口腔粘膜的最常见的恶性肿瘤，约80％的口腔粘膜恶性肿瘤病理类型为口腔鳞癌，占头颈部恶性肿瘤的40％左右，但其发病机制尚未研究清楚，治疗和诊断手段单一，因此深入了解口腔鳞癌的发病机制，并在此基础上探索早期发现并且能早期诊断、早期治疗的方法是十分迫切的。HtrA(Hi

2、曲temperaturerequirementA，IqtrA)属于丝氨酸蛋白酶家族的一员，是存在于细菌体内的一种蛋白质。2000年，研究者在哺乳动物细胞中观察到一种和HtrA相似的丝氨酸蛋白酶并取名为Omi。几乎同时，Savopoulos等利用杆状病毒表达质粒对Omi进行纯化，将其命名为HtrA2。已有许多学者研究观察到Omi／HtrA2在多种人癌细胞系中高表达，例如肝癌、胃癌、前列腺癌、喉癌等，但是Omi／HtrA2在以上各种癌细胞中的高表达与癌细胞凋亡、增殖以及生长的关系及其相互之间的作用机理尚未得出统一的结论

3、。本实验的目的是检测Omi／HtrA2蛋白在口腔鳞状细胞癌组织中的表达，初步探讨其在口腔鳞状细胞癌的发病中所起的作用，为口腔鳞癌患者的早期诊断、早期治疗、恶性程度分析以及预后判断找到新的突破点。方法：收集我院2010年10月．2011年06月间口腔鳞状细胞癌标本、癌旁粘膜标本(距瘤缘2cm)、正常粘膜标本(距瘤缘>5cm)和口腔粘膜上皮异常增生标本各50例。所有患者手术前均局部取检经病理证实，患者术前未经治疗。标本均为术后立即取材，一式两份，一份固定于4％甲醛中，送病检；一份置．80℃低温冰箱中编号保存备用。1免疫

4、组织化学法检测Omi／HtrA2在口腔鳞癌组织、癌旁组织、正常口腔粘膜组织和口腔鳞状上皮异常增生组织中的表达取各组包埋组织的蜡块，脱蜡至水，并按照Maxvision2／HRP试剂盒操作说明进行操作，光镜下观察，染色背景清晰，胞浆呈黄棕色为阳性，比较各组间Omi／HtrA2蛋白表达的差异是否有统计学意义。2RT-PCR方法检钡JJOmi／HtrA2基因在口腔鳞癌组织、癌旁组织、正常口腔粘膜组织和口腔鳞状上皮异常增生组织中的表达中文摘要Trizol法抽提总IUNA，所提取的总I斟A经琼脂糖凝胶电泳鉴定，并经紫外分光光度

5、计定量。将提取的RNA按逆转录试剂盒说明合成eDNA第1链。进行目的基因的扩增，扩增产物以GAPDH基因作内参，用凝胶成像系统进行观察及图像采集。电泳扫描观察结果，在相应位置上可见特异性的DNA条带。运用QuantityOne软件灰度扫描定量分析结果。3结果判断标准3．1免疫组织化学Omi／HtrA2染色阳性为胞浆出现棕黄色颗粒，以免疫组化半定量法评价其表达。3．2Omi／HtrA2基因表达水平的半定量分析以目的产物与GAPDH的条带进行灰度扫描得其相对表达量。4统计学方法应用SPSSl3．0统计软件包进行分析，采

6、用刀检验、多个均数比较的方差分析、SNK两两比较3种方法进行检验，以P<0．05为差异有统计学意义。结果：lOmi／HtrA2在口腔鳞癌组织、癌旁组织、正常口腔粘膜组织和口腔鳞状上皮异常增生组织中的表达Omih-ItrA2[jH性表达率最高的是口腔鳞癌组织组74％(37／50)，其次为口腔粘膜异常增生组织组38％(19／50)，癌旁组织组34％(17／50)而口腔粘膜正常组织组最低，为12％(6／50)，经卡方检验差异有统计学意义(p

7、鳞状上皮异常增生组织中RT．PCR检测结果Omi／HtrA2的灰度值最高的是口腔高分化口腔鳞癌组织组，其次是低分化口腔鳞癌组织组、口腔粘膜异常增生组织组、口腔鳞癌癌旁组织组，灰度值最低的是正常粘膜组织组，它们的灰度值分别是12．5100一+0．1454、10．1167±0．1475、7．4678±0．2092、6．2314+0．2318、1．2166+_0．1651，Omi／HtrA2基因在五种组织中的表达量间差异有统计学意义(F=1841Z435，p=0．ooo)，SNK法两两比较表明，高分化口腔鳞癌组中的表达均

8、高于低分化口腔鳞癌组织、口腔粘膜异常增生组织、口腔鳞癌癌旁组织和正常粘膜组织，差中文摘要异有统计学意义。RT．PCR结果显示，Omi／HtrA2在以上五组组织中的表达存在显著差异，呈递减趋势，与免疫组化结果相符合。．3口腔鳞癌组织中Omi／HtrA2的表达与病理分级的关系通过统计分析，免疫组化和RT．PCR结果显示Omi／HtrA2的表达与细胞分化程度有关，