研究口腔鳞癌组织中组织因子的表达

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1、研究口腔鳞癌组织中组织因子的表达　　肿瘤血管生成是指肿瘤细胞诱导的微血管生长以及肿瘤中血液循环建立的过程，它对于肿瘤的生长十分重要,是肿瘤代谢的关键途径。研究发现血管生成参与了包括口腔鳞癌（OSCC）在内的恶性肿瘤的侵袭、转移和复发过程[1～3]。组织因子（TF）即凝血III因子,是生理凝血过程中的重要启动因子。近年发现，恶性细胞、肿瘤浸润的巨噬细胞或内皮细胞上均有TF的高表达，它通过调节血管生成开关系统，在肿瘤血管生成过程中发挥重要作用。TF的表达调控及活性调节研究已成为目前阐明肿瘤血管生成机制的新热点。目前TF在OSCC组织中的研究国内外少见报道，本实验通

2、过免疫组织化学的方法从蛋白水平对OSCC中TF的表达进行研究，并探索其与微血管密度（MVD）、淋巴结转移的关系，以了解其在口腔肿瘤血管生成中的功能。　　1材料和方法　　1.1临床资料　　收集2005-2006年口腔颌面外科手术切除或活检的标本67例,分OSCC原发灶组、转移淋巴结组和正常口腔黏膜组。OSCC组42例，男23例，女19例，年龄43～76岁,平均56.92岁；其中舌癌11例，牙龈癌7例，口底癌14例，颊癌5例，腭癌5例；有区域淋巴结转移15例，无淋巴结转移27例；按TNM临床分期，Ⅰ～Ⅱ期13例，Ⅲ～Ⅳ期29例。正常口腔黏膜组10例，男5例，女5例

3、，取自无烟酒嗜好的外伤或正畸拔牙病人。肿瘤标本术前未经任何针对肿瘤的治疗，所有标本均经病理证实。　　1.2方法　　兔抗人TF多克隆抗体（工作浓度1∶50），兔抗人CD34多克隆抗体（工作浓度1∶50），免疫组织化学单染SABC试剂盒及DAB显色剂均购自武汉博士德生物工程公司。所有的组织标本经石蜡包埋切片，连续切5张，厚约4μm。采用免疫组织化学SABC法，染色程序按试剂盒说明书进行。微波抗原修复:将切片置于0.01mol/L（pH6.0）枸橼酸盐缓冲液500ml中微波加热至沸腾后（高火）保持3min，然后低火保持10min,取出自然冷却至室温。用PBS代

4、替一抗作阴性对照。　　1.3免疫组织化学结果判断　　以细胞质内出现棕黄色颗粒判断为TF阳性细胞。在400倍高倍镜下随机选择3个上皮或癌变视野下按照阳性细胞百贵阳医学院学报33卷4期魏宏琳等口腔鳞癌组织中组织因子的表达分比记分：阳性细胞数＜30%为阴性表达，＞30%为阳性表达。MVD的评定通过光镜下计数CD34染色阳性的血管内皮，先在低倍镜下寻找血管高密度区（热点区域），再在400倍镜下计数微血管数目；分别计数3个视野,取平均数表示MVD值。在热点地区进行血管计数是因为该区更能反映肿瘤的恶性潜能[4]，每1个染成棕黄色又可与周围血管、肿瘤细胞和其它结缔组织分开的

5、内皮细胞或内皮细胞簇被判定为1个微血管[4]。　　1.4统计学处理　　各组数据以x±s表示，采用SPSS13.0统计软件包进行，根据数据类型分别采用t检验、行X列表χ2和方差分析,P＜0.05有统计学意义。　　2结果　　2.1TF的染色结果及表达　　正常口腔黏膜组织中可见少量着色，多位于基底层（图1）。癌组织中TF阳性细胞分布呈异质性，且染色程度存在差异，阳性细胞胞浆或胞膜呈棕黄色，阳性颗粒粗细不等（图2），尤其见于癌巢边缘。此外，在转移淋巴结中TF阳性细胞为转移癌细胞（图3）。OSCC、转移淋巴结及正常口腔黏膜组织中TF的表达见表1。表

6、1TF在口腔鳞癌、转移淋巴结和正常组织中的表达（略）注：正常组与淋巴结转移组比较P＜0.01（χ2=7.819）,正常组与鳞癌组比较P＜0.01(χ2=9.578)，淋巴结转移组与鳞癌组比较P＞0.05（χ2=0.028）。　2.2CD34的表达　　CD34免疫染色定位于血管内皮细胞膜上。正常口腔黏膜组织中微血管分布较少且均匀;OSCC中微血管形态不规则，分布不均，癌灶边缘血管最密集，呈簇状（图4）。　　2.3OSCC组织中TF表达与MVD、临床病理特征的关系　　TF的表达和MVD在OSCC不同临床分期、颈淋巴结转移组间差异有统计学意义

7、，见表2。表2口腔鳞状细胞癌组织中TF表达与MVD、临床病理特征的关系（略）　　3讨论　　　　研究表明，恶性肿瘤的无限制侵袭性生长及其转移与微血管生成密切相关。微血管的形成为肿瘤的生长和增殖提供氧气和营养物质，并为肿瘤的进一步转移提供通道。前期研究表明，在口腔癌中有大量的血管生成，并和肿瘤的生长、淋巴结的转移密切相关[1]，但口腔癌中血管生成的机理尚不十分清楚。　　　　本研究结果表明，TF在正常口腔黏膜组织中表达弱，而在OSCC组织中的表达显著上调(P<0.01)，阳性表达率为64.29%（27/42），这与TF在其他多数肿瘤内表达情况相一致。TF在口腔

8、癌组织中过表达提示它可能与肿瘤发生、发