mitofusin2基因对大鼠血管平滑肌细胞a7r5凋亡作用的研究

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1、分类号：R5单位代码：10752密级：公开学号：2009218宁夏医科大学硕士研究生学位论文Mitofusin2基因对大鼠血管平滑肌细胞A7r5凋亡作用的研究StudyontheEffectofMitofusin2onA7r5CellApoptosis学位申请人：王小婕指导教师：何军副教授申请学位门类级别：医学专业名称：内科学研究方向：动脉粥样硬化机制所在学院：临床医学院论文完成日期：二○一二年四月宁夏医科大学研究生院NingxiaMedicalUniversityThesisforApplicationofMaster’sDegreeStud

2、yontheEffectofMitofusin2onA7r5CellApoptosisStudent’sName:WangXiaojieSupervisor：HeJunSubjectCategory:MedicineMajor:InternalMedicineSpecialty:AtherosclerosisCollege:ClinicalInstituteCompletionDate:Apr.2012宁夏医科大学学位论文独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是个人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果，无抄袭及编造行为。除文中已经特

3、别加以注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明并致谢。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。论文作者签名＿＿＿＿＿论文导师签名＿＿＿＿＿年月日年月日宁夏医科大学关于学位论文使用授权的声明宁夏医科大学有权保留使用本人学位论文，同意学校按规定向国家有关部门机构送交论文的复印件和电子版，允许被查阅和借阅。本人授权宁夏医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复印手段保存和汇编本学位论文。可以公布（包括刊登）

4、论文的全部或部分内容。（保密论文在解密后应遵守此规定）论文作者签名＿＿＿＿＿论文导师签名＿＿＿＿＿年月日年月日宁夏医科大学硕士研究生学位论文中文摘要Mitofusin2基因对大鼠血管平滑肌细胞A7r5凋亡作用的研究摘要目的研究外源性线粒体融合蛋白2基因(Mitofusin2,Mfn2)对大鼠主动脉平滑肌细胞A7r5凋亡的影响，并对其可能的分子机制进行探讨。方法将重组质粒pEGFP-mfn2在阳离子脂质体Lipofectamine2000的介导下体外转染A7r5细胞,将细胞分为三组：空白对照组（control组，未转染）、空载体对照组（pEGFP

5、–N1组，转染空质粒）和实验组（pEGFP–mfn2组，转染pEGFP–mfn2）。转染后，用流式细胞仪（FCM）测定转染效率。分别于转染后48h收获三组细胞，采用Westernblot检测Mfn2的表达。采用Hoechst染色激光共聚焦显微镜、AnnexinV-PE/7-AAD双染流式细胞仪及一步TUNEL细胞凋亡检测法观察Mfn2对A7r5凋亡的影响并计算凋亡率。WesternBlot方法检测三组细胞中凋亡相关因子Bcl-xl、Bax、Caspase-9以及磷酸化Akt（p-Akt）和磷酸化Bad(p-Bad)的表达。采用方差分析对数据进行

6、统计学处理。结果以流式细胞仪测定转染效率，pEGFP–N1组和pEGFP–mfn2组于转染48h转染效率达到最高，分别为（63.3±2.4）%和（65.2±3.5）%，两组比较差异无显著性（P＞0.05）。Westernblot检测显示，pEGFP–mfn2组Mfn2蛋白表达水平增高,其半定量结果为（1.084±0.057），control组和pEGFP–N1组mfn2蛋白表达半定量分别为（0.534±0.075）、（0.552±0.034），pEGFP–mfn2组与两对照组比较差异均有显著性（均P<0.05）。Hoechst染色激光共聚焦显微

7、镜观察显示，转染后48h，pEGFP–mfn2组细胞凋亡率为（13.37±2.85）%，与control组（0.92±0.05）%和pEGFP–N1组（1.33±0.06）%相比差异均有统计学意义（均P<0.05）。AnnexinV-PE/7-AAD双染流式细胞仪分析结果显示：转染48h及72h，pEGFP–mfn2组细胞凋亡率分别为（15.74±2.42）%、（32.23±3.91）%，空白对照组和空载体对照组细胞均未发生明显凋亡，前者与后二者比较差异均有统计学意义（均P<0.01）。转染72h一步TUNEL法荧光显微镜观察，实1宁夏医科大学

8、硕士研究生学位论文中文摘要验组可见标记红色荧光的凋亡细胞，其阳性细胞数为（21.3±2.8）%，两对照组未见明显标记红色荧光的晚期凋亡细胞。转染后48