mdm2p53通路在糖尿病心肌病中的作用及机制研究

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1、中图分类号：R318；R587硕士学位论文MDM2/P53通路在糖尿病心肌病中的作用及机制研究院（系）、所临床医学院研究生姓名羊暑艳学科、专业内科学导师姓名万沁教授二Ο一二年四月目录1MDM2/p53通路在糖尿病心肌病中的作用及机制研究„„11.1中文摘要„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„11.2英文摘要„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„41.3前言„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„81.4材料与方法„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„111.5结果„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„

2、„191.6讨论„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„241.7结论„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„311.8参考文献„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„321.9英汉缩略词对照表„„„„„„„„„„„„„„„„„382致谢„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„39MDM2/p53通路与心血管疾病的研究进展（综述）„„„„403MDM2/p53通路在糖尿病心肌病中的作用及机制研究摘要目的：糖尿病心肌病(Diabeticcardiomyopathy，DCM)是糖尿病（Diabeticmell

3、itus，DM）最常见的并发症之一，是糖尿病患者致残、致死的重要原因。糖尿病心肌病主要的发病机制包括心肌细胞代谢障碍、微血管病变、心脏自主神经病变及胰岛素抵抗等导致的一系列病理改变。其主要的病理表现为心肌细胞肥大、心肌肥厚、心肌间质纤维化以及心肌细胞的凋亡等。临床表现早期为心脏的舒张功能受损，逐渐出现收缩功能障碍，最终可导致心力衰竭。目前研究认为MDM2（Murinedouble-minute2，鼠双微粒体蛋白2）和可通过一些途径对糖尿病心肌病产生影响：如MDM2可以抑制心肌肥厚；p53可以促进心肌细胞凋亡等等。MDM2与p

4、53之间构成降解-反式激活循环通路:MDM2通过使p53泛素化导致p53降解，而p53反式激活因子诱导MDM2,消除反馈循环。研究MDM2/p53与糖尿病心肌病发病机制中的关键环节心肌肥厚、心肌细胞凋亡之间的关系，通过干扰两者之间的反馈循环，使p53蛋白表达降低，从而使心肌纤维化、心肌肥厚及心肌细胞凋亡的发生发展受到抑制，这可能是糖尿病心肌病很有希望的治疗方式。故本实验以链脲佐菌素（Streptozotocin，STZ）腹腔注射建立糖尿病心肌病大鼠模型，探讨MDM2/p53通路在糖尿病心肌病中的作用及机制。方法：1、模型的建

5、立及分组：将25只健康雄性Wistar大鼠适应性喂养一周后,随机分为正常对照组(Normalcontrol，NC组)10只和糖尿病组(Diabetesmellitus,DM组)15只。DM组大鼠一次性腹腔注射STZ60mg/kg，NC组大鼠予以等剂量的枸橼1酸缓冲液。所有大鼠均以原饲料继续喂养8周。2、心脏采血测定空腹血糖。3、心脏采血后迅速取出心脏,用等渗盐水洗净,滤纸吸干,称心脏重量,计算左心室重量指数。4、HE染色和Masson染色：取左心室游离壁组织,常规固定,石蜡包埋，观察心肌细胞大小及心肌纤维化情况。5、透射电镜

6、观察心肌超微结构的变化。6、TUNEL法检测心肌细胞凋亡指数。7、蛋白免疫印迹(Western-blot)法检测心肌组织MDM2、P53蛋白表达。8、统计学处理：应用SPSS17.0统计软件统计分析，数据以均数±标准差(x¯±s)表示，组间比较采用独立样本均数t检验，相关指标之间采用直线相关分析，检验水准α=0.05，P<0.05表示有统计学意义。结果：1、大鼠一般情况指标：⑴血糖：DM组较NC组血糖升高(P<0.01)。⑵体重：DM组较NC组体重明显减轻(P<0.01)。⑶心体比及左心室重量指数：DM组较NC组心体比及左心

7、室重量指数均增加(P<0.01)。2、HE染色：DM组心肌细胞体积增大(P<0.01)。3、Masson染色：DM组较NC组心肌胶原纤维增多(P<0.01)。4、TUNEL：DM组较NC组心肌细胞凋亡指数增加(P<0.01)。5、电镜：NC组心肌细胞形态正常，肌丝丰富、排列紧密，线粒体形态正常；DM组心肌细胞肥大，心肌稀疏，部分有断裂甚至溶解，线粒体肿胀。6、心脏组织MDM2、P53蛋白表达:与NC组比较，DM组P53蛋白表达增加，MDM2蛋白表达减少。7、p53和MDM2蛋白表达成负相关；p53与心肌细胞凋亡指数、左心室重

8、量、心肌胶原容积分数均成正相关；MDM2与心肌细胞凋亡指数、左心室重量、心肌胶原容积分数均成负相关。结论：1、糖尿病心肌病时存在心肌细胞凋亡、心肌细胞肥大及心肌肥厚、心肌纤维化。2、糖尿病心肌病2时p53蛋白表达增加而MDM2蛋白表达降低。3、p53可引起心肌细胞凋亡、心肌纤维化及心室肥厚