jwa基因对食管癌eca109细胞体外生长的抑制作用

《jwa基因对食管癌eca109细胞体外生长的抑制作用》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、江苏大学硕士学位论文JWA基因对食管癌Eca109细胞体外生长的抑制作用姓名：史国振申请学位级别：硕士专业：外科学指导教师：谈永飞20120608江苏大学硕士学位论文摘要【目的】JWA基因是周建伟等1998年发现和克隆的受全反式维甲酸诱导的新的细胞骨架相关基因。近年来研究显示该基因具有肿瘤转移抑制作用。目前关于JWA基因与人类食管癌发生、发展关系的研究国内外尚未见报道。本文旨在探讨JWA基因对食管鳞癌Ecal09细胞增殖及侵袭能力的影响。通过基因重组技术构建JWA真核表达载体，将其转染人食管癌Ecal09细胞株，观察重组表达载体对Ecal09细胞生物学行为的影

2、响。探寻JWA基因在食管癌Ecal09细胞发生、发展中的作用，从而为食管癌机理研究和基因治疗方面提供新的思路和理论依据。【方法】1)提取Ecal09细胞总RNA，根据人JWA基因序列设计引物，应用RT-PCR法扩增目的片断，通过双酶切定向克隆的方法构建JWA真核表达载体pcDNA3．0一JWA。2)应用脂质体(Lipofectamine2000)将重组表达载体导入Ecal09细胞，G418筛选阳性克隆，PCR鉴定转染结果。3)通过MTT比色、软琼脂集落形成、Transwell细胞运动和Transwell细胞侵袭等一系列细胞功能学实验，观察稳定转染细胞株JWA表

3、达对肿瘤细胞增殖、粘附、运动和侵袭的影响。【结果】1)经过筛选、酶切以及测序鉴定，证实成功构建JWA基因真核JWA基冈对食管癌Ecal09细胞体外生长的抑制作用表达载体pcDNA3．0一JWA。2)经脂质体转染及G418筛选，重组体组及空载体组均有阳性克隆形成，用PCR法证实两种载体均成功整合到受体细胞基因组DNA中。重组体转染组细胞中JWA基因mRNA和蛋白表达量较空载体转染组和未转染组上调。3)对转染前后的肿瘤细胞观察表明，重组体转染组细胞生长减慢，克隆形成率降低，细胞迁移、运动能力和侵袭能力降低。【结论】1)成功构建了JWA基因的真核表达载体。2)应用脂

4、质体转染法成功将JWA基因的真核表达载体导入Ecal09细胞，真核表达载体显著上调了JWA基因mRNA和蛋白的表达。3)JWA基因真核表达载体能够显著抑制食管癌Ecal09细胞增殖，降低肿瘤细胞对周围组织的侵袭作用，提示JWA基因可能是食管鳞癌生物治疗的潜在靶点。【关键词】JWA基因；食管鳞癌；基因转染；细胞增殖；细胞侵袭；Transwell江苏大学硕士学位论文[Objective]ABSTRACTJWAgene，discoveredandclonedbyZhouJianweietalin1998，isanewcytoskeletonassociatedgen

5、ewhichisinducedbyalltransretinoicacid．Recentstudiesshowthatithasinhibitoryeffectonneoplasmmetastasis．ByfartheresearchontherelationshipbetweenJWAgeneandtheoccurrenceanddevelopmentofesophagealcancerhasnotbeenreportedyethomeandabroad．ThisarticleismainlyonhowJWAgeneaffectsEcal09cells’pr

6、oliferationandinvasionofesophagealsquamouscellcarcinoma．Firstly,constructJWAeukaryoticexpressionvectorsbyrecombinantgenetechnology,transfectthemtohumanesophagealcancerEcal09cells，andobservehowtheyaffectthebiologicalbehaviorofEcal09cells．Then，probehowJWAgeneworksintheoccurrenceanddev

7、elopmentofEcal09cells，whichwillprovidenewthoughtsandtheoreticalfoundationsforthemechanismstudyandgenetictherapyofesophagealcancer．[Methods]1)ExtractionofEcal09celltotalRNA，accordingtoJWAgenesequencespecificprimersweredesigned，usingRT-PCRmethodtargetsegments，bydoubleenzymecuttingdire

8、ctionalcloningmetho