akt抑制剂鱼藤素对膀胱癌t-24细胞生长的影响及机制的研究

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1、分类号R6密级公开UDC610硕士学位论文Akt抑制剂鱼藤素对膀胱癌T-24细胞生长的影响及机制的研究学位申请人：江克华学科专业：外科学指导教师：宋兴福教授二○一二年五月ADissertationSubmittedinPartialFulfillmentoftheRequirementsfortheDegreeofMasterofMedicineEffectsofAktInhibitorDeguelinontheGrowthofBladderCancerCellsandItsMechanismGraduateStud

2、ent:JiangKehuaMajor:SurgerySupervisor:Prof.SongXingfuChinaThreeGorgesUniversityYichang,443002,P.R.ChinaMay,2012三峡大学硕士学位论文三峡大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果，除文中已经注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体均已在文中以明确方式标明，本人完全意识到本声明的法

3、律后果由本人承担。学位论文作者签名：日期：三峡大学研究生知识产权承诺书本人承认：我作为三峡大学硕士研究生在校学习期间，在导师指导下，依据研究工作所作学位论文的知识产权全部权归三峡大学所有。本人承诺：我有义务维护三峡大学的知识产权，凡是以我本人学位论文内的全部或部分研究成果，或实验数据为基础所形成的研究论文及成果，无论是以何种形式刊发学术论文、进行成果鉴定或申报奖励，均以三峡大学为第一作者单位或完成单位，并事先征得导师或学校相关部门的同意。我愿承担因违背上述承诺而引起的一切法津和经济后果。学位论文作者签名：日期：I三峡

4、大学硕士学位论文内容摘要目的：研究Akt抑制剂鱼藤素对膀胱癌T-24细胞株生长的影响，并初步探讨其可能的作用机制;以及探讨Akt抑制剂与传统的化疗药物顺铂、紫杉醇等联合应用对膀胱癌T-24细胞株的抑制作用，为Akt抑制剂鱼藤素靶向治疗膀胱癌以及抑制PI3K/Akt信号通路提高膀胱癌的化疗效果提供相应的理论依据。方法：(1)用MTT法检测Akt抑制剂鱼藤素对膀胱癌T-24细胞的抑制效应，以及用倒置显微镜观察鱼藤素对膀胱癌T-24细胞形态学的影响；(2)用DNA片段化检测Akt抑制鱼藤素对膀胱癌T-24细胞凋亡的影响；(

5、3)用细胞划痕愈合试验检测Akt抑制鱼藤素对膀胱癌T-24细胞迁移能力的影响；(4)用流式细胞术检测不同浓度的Akt抑制剂鱼藤素对膀胱癌T-24细胞周期的影响；(5)用RT-PCR法检测Akt抑制剂鱼藤素对膀胱癌T-24细胞中MDM2、GSK3βmRNA表达的影响；(6)用蛋白印迹法检测Akt抑制剂鱼藤素对膀胱癌T-24细胞中MDM2、GSK3β蛋白表达的影响；(7)分别用MTT法、流式细胞术检测Akt抑制剂鱼藤素与传统化疗药物顺铂、紫杉醇单独以及联合应用对膀胱癌T-24细胞的抑制效应。结果:(1)MTT法结果显示A

6、kt抑制剂鱼藤素可显著抑制膀胱癌T-24细胞的增殖，且其抑制率呈时间、药物浓度依赖性；倒置显微镜观察结果显示鱼藤素处理后的膀胱癌T-24细胞呈现皱缩、空泡、缩小、脱壁等相应增殖变缓的形态学改变；(2)DNA片段化结果显示鱼藤素可诱导膀胱癌T-24细胞的凋亡；(3)划痕愈合实验结果显示，Akt抑制剂鱼藤素可降低T-24细胞的迁移能力；(4)流式细胞术结果显示，与对照组比较，鱼藤素使膀胱癌T-24细胞G0/G1期所占比例增加，S期比例减少，使周期主要阻滞在G0/G1期，从而显著抑制膀胱癌T-24细胞的增殖；(5)RT-P

7、CR结果显示，鱼藤素处理膀胱癌T-24细胞后使MDM2mRNA的表达水平下降，而使GSK3βmRNA的表达水平增加；(6)蛋白印迹法检测发现鱼藤素下调了MDM2蛋白的表达，上调了GSK3β蛋白的表达；(7)MTT法、流式细胞术结果显示鱼藤素与传统的化疗药物顺铂、紫杉醇联合应用可显著的抑制膀胱癌T-24细胞的生长，并能显著的提高传统化疗药物的疗效。结论：Akt抑制剂鱼藤素能够显著抑制膀胱癌T-24细胞的增殖，并可诱导其凋亡以及影响其迁移，阻滞细胞的周期，其机制可能与影响Akt通路下游信号分子MDM2以及GSK3β的表达

8、相关；并且Akt抑制剂鱼藤素能够显著提高传统化疗药物顺铂、紫杉醇对膀胱癌T-24细胞的杀伤作用。本研究为Akt抑制剂鱼藤素靶向治疗膀胱癌以及提高膀胱癌的化疗疗效提供了一定的理论依据。关键词：鱼藤素Akt信号通路靶向治疗膀胱癌增敏作用II三峡大学硕士学位论文AbstractObjective：TostudytheeffectsofAktinhib