5-杂氮胞苷对小鼠内皮祖细胞干细胞抗原-1表达的影响

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1、中南大学博士学位论文5--杂氮胞苷对小鼠内皮祖细胞干细胞抗原--1表达的影响姓名：叶吉如申请学位级别：博士专业：临床医学指导教师：陈平；陈燕20120529八年制博士学位论文中文摘要摘要目的：证实EPCs表面是否表达Sca-1。探讨体外CSE和DNA甲基化转移酶抑制剂5-azaC是否影响EPCs增殖能力和Sea-1蛋白表达，且EPCs增殖能力与Sca-1蛋白表达改变是否存在相关性，进而探究CSE和5-azaC是否通过Sca-1基因启动子区DNA甲基化机制调控Sca-1蛋白表达，从而影响EPCs增殖能力。方法：小鼠骨髓密度梯度离心法体外分离培养EP

2、Cs。通过显微镜下细胞形态学改变，DiI．acLDL摄取及FITC-UEA．I结合双染鉴定，流式细胞术检测细胞表面标志变化等综合鉴定EPCs。使用CSE和5．azaC体外干预EPCs。使用MTT法测EPCs增殖能力。使用westem-blot澳1]定EPCs表面Sca-1蛋白表达。使用BSP法测定Sca-1基因启动子区DNA甲基化序列改变。结果：(1)密度梯度离心法培养第7天贴壁细胞双染阳性率为(94．67+4．16)％，培养7天的贴壁细胞上EPCs特异性表面抗原FITC-CD34、PE．CDl33、APC-FIk-I的表达，抗原三阳率为(95．

3、07a：1．73)％，提示培养细胞为EPCs。培养7天的贴壁细胞上EPCs特异性表面抗原FITC．CD34、PE．CDl33、APC．Flk-1，PerCP．Sca-1的表达，抗原四阳率为(94．OQ士1．67)％。F_,PCs中表达Pe把P-Sea-1阳性率(98．87i-0．24)％。本课题资助基金：国家自然科学基金(81070039)八年制博士学位论文中文摘要(2)MTT法测EPCs增殖能力改变所得OD值，代表细胞线粒体活性，即活细胞数目。CSE干预EPCs3小时，与对照组比较，1％CSE组，2．5％CSE组细胞OD值显著增加(均P<0．0

4、5)，此后随着CSE浓度增加，5％CSE组，10％CSE组细胞OD值显著下降(均P<0．05)。CSE干预EPCs6小时，与对照组比较，CSE干预浓度增加至1％时，细胞OD值显著增加(P

5、)。与CSE组比较，1％CSE+2umol／L5-azaC组，1％CSE+5umol／L5-azaC组细胞OD值增加(均P<0．05)。1％CSE+2umol／L5．azaC组，1％CSE+5umol／L5-azaC组细胞OD值差异无统计学意义(P>O．05)。(4)与对照组比较，CSE组Sca-1蛋白表达显著下降(PO．05)。与CSE组比较，对照组，AZA组，CSE+AZA组Sca-1蛋白表达显著上升(均P

6、异无统计学意义(P>O．05)。(5)对照组，CSE组，旭～组，CSE+AZA组各组Sca-1启动子区平均甲基化率差异无统计学意义(P>0．05)。II八年制博士学位论文中文摘要结论：鼠类EPCs表面高度表达Sca-1蛋白。体外CSE干预EPCs，早期EPCs可呈现代偿性增殖能力上升，后期增殖能力下降，甚至增殖停滞。被CSE所抑制EPCs增殖作用可以被体外5一azaC干预改善。CSE和5-azaC体外干预EPCs，EPCs表面Sea-1蛋白表达与EPCs的增殖能力改变趋势一致。5-azaC影响Sca-1蛋白表达，其去甲基化作用位点位于Sca-I基

7、因启动子区，或组蛋白或Sea-1上游调控因子处有待进一步研究。关键词内皮祖细胞，干细胞抗原．1，Ⅸ呛甲基化，香烟烟雾提取物，增殖能力III八年制博士学位论文英文摘要Objective：ABSTRACTToobservethestemcellantigen-l(Sca-1)proteinexpressiononmurineendothelialprogenitorcells(EPCs)．ToinvestigatewhetherCSEand5-azaCCanaffectEPCs’proliferationcapacityandSca-1protein

8、expressioninvitro，andanalysistherelationshipbetweenEPCs’proliferatio