5-脱氧杂氮胞苷对鼻咽癌kank1基因去甲基化作用的研究

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1、万方数据中图分类号＆丝UDC610硕士学位论文学校代码!Q§三三密级公开5．脱氧杂氮胞苷对鼻咽癌Kankl基因去甲基化作用的研究ResearchofKanklgenedemethylationinnasopharyngealcarcinomacelllinestreatedwith5．AzaCdR作者姓名：学科专业：研究方向：学院(系、所)：指导教师：副指导教师：论文答辩日期型竺：兰：弗肖珊药物分析学体内药物分析药学院马虹英副教授汤参娥副教授答辩委员会主席二型中南大学二。一四年五月学位论文原创性声明一万方数据本人郑重声明，所呈交的学位论文是本人在导

2、师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。作者签名：!苴竭日期：坐年上月—王日学位论文版权使用授权书本学位论文作者和指导教师完全了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定：即学校有权保留并向国家有关部门或机构送交学位论文的复印件和电子版；本人允许本学位论文被查阅和借阅；学校可以将本

3、学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用复印、缩印或其它手段保存和汇编本学位论文。保密论文待解密后适应本声明。作者签名：盔煎日期：业年—生月三日导师签名：』兰0日期：丝年』月三日万方数据5．脱氧杂氮胞苷对鼻咽癌细胞株Kankl基因去甲基化作用的研究摘要目的：本研究采用5一脱氧杂氮胞苷(5．Aza-CdR)对鼻咽癌不同细胞株进行处理，检测药物对细胞Kankl基因mRNA和蛋白表达的影响；检测Kankl基因启动子区甲基化变化情况；并分析肿瘤细胞生物学行为变化，为进一步探讨鼻咽癌的发生机制并寻找鼻咽癌治疗的新方法，同时对去甲基化药物5一脱

4、氧杂氮胞苷在鼻咽癌中的应用做初步探索，为5．脱氧杂氮胞苷在临床中的应用提供新思路。方法：选用鼻咽癌细胞株5—8F，6—10B，CNEl，CNE2和正常鼻咽上皮细胞株NP69，再次验证Kankl基因在鼻咽癌细胞株中的低表达，将相对最低表达的6．10B，CNEl细胞株设为不加任何处理的对照组和经不同浓度5-Aza-CdR处理的实验组。利用实时荧光定量PCR及WesternBlotting检测用药前后Kankl基因的表达变化；采用BSP克隆测序法检测Kankl基因启动子区CpG岛甲基化变化情况：同时检测用药前后细胞生物学行为变化，其中包括：相差显微镜观察

5、各实验组细胞形态学改变情况；采用MTT比色法检测不同浓度5-Aza-CdR对细胞增殖的影响；利用流式细胞术检测不同浓度5-Aza-CdR处理72h后的细胞凋亡率。结果：1．与正常鼻咽上皮细胞NP69相比，Kankl在鼻咽癌细胞株5．8F，6．10B，CNEl，CNE2中表达下调。2．不同浓度5-Aza-CdR干预6．10B，CNEl细胞后其Kankl的表II万方数据达得到不同程度上调，其表达上调程度与药物浓度成正比。3．WesternBlotting方法检测经10uM浓度5-Aza-CdR处理6．10B，CNEl细胞72h较未处理对照组其Kankl

6、蛋白表达增强。4．BSP克隆测序结果表明，经药物5-Aza-CdR处理的6．10B，CNEl细胞中Kankl基因启动子区域得到逆转，其平均甲基化百分数分别为11．11％、13．33％，明显低于未经药物处理组的甲基化化水平(分别为64．44％、64．44％，P<0．01)。5．MTT检测发现5-Aza-CdR可以明显抑制6—10B，CNEl细胞的生长与增殖。6．流式细胞术检测结果表明细胞经药物处理后其凋亡率明显高于对照组，5-Aza-CdR能诱导细胞凋亡。结论：5-Aza-CdR能够有效逆转鼻咽癌细胞株6．10B，CNEl中Kankl基因的异常甲基化

7、，恢复KanklmRNA和蛋白的表达，从而诱导肿瘤细胞凋亡，抑制鼻咽癌细胞生长。本实验：图37幅，表格19个，文献96篇。关键词：鼻咽癌；Kankl基因；5．脱氧杂氮胞苷；去甲基化分类号：R94；R979．1+9III万方数据ResearchofKanklgenedemethylationinnasopharyngealcarcinomacelllinestreatedwith5．．Aza．．CdRAbstractObjective：Inthisstudy，fournasopharyngealcarcinomacelllinesweretreate

8、dwith5-Azaazacytidine(5-Aza-CdR)todetecttheexpressionofKank1g