5-氮杂-527-脱氧胞苷的合成工艺优化及其对skov3作用的研究

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1、安徽医科大学硕士论文rpmrevolutionsperminute每分钟转数RSDrelativestandarddeviation相对标准差SAMS-adenosylmethionineS-腺苷甲硫氨酸TLCthin-layerchromatography薄层色谱法TMSOTfTrimethylsilyTrifluoromethanesulfonate三氟甲磺酸三甲基硅酯UVultravioletspectrophotometry紫外分光光度法μgmicrogram微克μlmicroliter微升μmmicrometer微米-2-

2、安徽医科大学硕士论文5-氮杂-5'-脱氧胞苷的合成工艺优化及其对SKOV3作用的研究研究生李飞龙导师李俊教授汤文建副教授安徽医科大学药学院中文摘要多数肿瘤细胞的DNA甲基转移酶（DNAmethyltransferase,DNMT）水平表达明显高于正常细胞，并与抑癌基因启动子高甲基化状态相关，DNMT抑制剂类药物是一类通过抑制DNMT的活性、逆转基因的异常甲基化状态，从而达到抗癌效果的药物。胞苷类似物作为DNA甲基化酶抑制剂，能够逆转基因的甲基化状态，从而恢复基因的表达水平，纠正肿瘤细胞的异常生物学特征，在肿瘤研究中受到极大的关注。本

3、课题前期以双氰胺为原料合成、分离得到5-氮杂-5'-脱氧胞（5-Aza-5'-deoxycytidine,5A5DC），实验证实了β-异构体有着较强的生物活性。但在合成方面，存在催化剂价格过高、反应时间长、纯化方法复杂等缺点。因此本文旨在优化其合成工艺、降低成本、提高产率，并探讨5A5DC对SKOV3的增殖及细胞周期的影响。具体研究工作分为以下两个部分：1.5-氮杂-5'-脱氧胞苷（5A5DC）的合成及工艺优化通过分析各种核苷类化合物的合成方法，确定了本文的合成路线:5-氮杂胞嘧啶经硅烷化保护，在路易斯酸作用下与1,2,3-三乙酰基

4、-5-脱氧-D-核糖进行偶联得-3-安徽医科大学硕士论文2',3'-二乙酰氧基-5'-脱氧-5-氮杂胞苷，最后经碱性脱保护、乙酸乙酯重结晶得5A5DC。通过正交设计，比较在Hilbert-Johnson偶联反应中不同Lewis酸、溶剂和反应时间对合成5A5DC的影响。以无水SnCl4为Lewis酸，1,2-二氯乙烷为催化剂、反应时间为8h时，5A5DC的收率最高。以双氰胺计，总收率为31%。1.5A5DC对卵巢癌细胞株SKOV3的影响2.1.5A5DC对SKOV3细胞生长曲线的影响SKOV3对数期生长期细胞，加入不同浓度的5A5DC

5、，台盼蓝染色后光镜下进行细胞计数，连续计数7d，绘制生长曲线。5A5DC对SKOV3细胞增殖具有不同程度的抑制作用,呈现剂量依赖关系。剂量愈大，生长曲线愈低平。其中剂量大于100μmol/L抑制作用较为明显。2.2.MTT法检测5A5DC对SKOV3细胞增殖的影响SKOV3对数期生长期细胞，加入不同浓度的5A5DC，MTT法检测5A5DC对SKOV3细胞增殖抑制的影响。5A5DC作用细胞72h后，对SKOV3具有不同程度的抑制作用，呈现剂量依赖关系，其中以200μmol/L抑制效应最为强。2.3.流式细胞术检测对SKOV3细胞周期的

6、影响流式细胞仪检测5A5DC作用SKOV3细胞72h后，SKOV3细胞周期变化情况，当5A5DC的浓度达到100μmol/L以上，细胞周期的G0/G1期明显受到阻滞。关键词：5-氮杂-5'-脱氧胞苷；Hilbert-Johnson偶联反应；Lewis酸；SKOV3。-4-安徽医科大学硕士论文StudyonsynthesisandactivityofSKOV3of5-Aza-5'-deoxycytidinePh.MCandidate:LiFeilongSupervisor:Prof.LiJunSchoolofPharmacy,Anhu

7、iMedicalUniversioty,Hefei,PR.ChinaAbstractTheexpressionlevelofDNAmethyltransferase(DNAmethyltransferase,DNMT)ofmosttumorcellswashigherthannormalcells,andrelevantwiththehypermethylationstatusoftumorsuppressorgenepromoter,DNMTinhibitorsareaclassofdrugsbyinhibitingtheacti

8、vityofDNMTtoreversetheabnormalgenemethylationstatus,toachievetheanti-cancereffect.CytidineanalogsasDNAmethyltransfera