hla―dr3基因和胰岛素依赖型糖尿病相关性探析

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1、HLA-DR3基因和胰岛素依赖型糖尿病相关性探析摘要：目的：探讨HLA-DR3基因与胰岛素依赖型糖尿病(IDDM)相关性。方法：选取在我院接受治疗的胰岛素依赖型糖尿病患者68例为实验组，再选取与患者无血缘关系的健康人68例为对照组，分别进行PCR扩增，然后对所有PCR产物的DR3基因特异性寡核昔酸顺序进行检测，对比得出实验结果并进行分析。然后将实验组人员根据年龄再分成3个组，分别为甲组，乙组和丙组，从而分析患者患病年龄与携带DRB10301基因的关系。结果：实验组68例IDDM患者中，DRB10301基因携带者达到35人；而对照组68例健康人中，DRB1030

2、1基因携带者的人数达到5人。甲组22例患者中，DRB10301基因阳性率为72.73%；乙组24例患者中，DRB10301基因阳性率为54.17%；丙组22例患者中,DRB10301基因阳性率为22.73%O结论：HLA-DR基因与胰岛素依赖型糖尿存在相关性，HLA-DR3基因在不同年龄胰岛素依赖型糖尿病患者间有差异性。关键词：HLA-DR3基因；胰岛素依赖型糖尿病；年龄中图分类号：R587.1文献标识码：C文章编号：1005-0515(2013)11-017-02近年来，随着人们生活方式的变化以及人口老龄化进程的加速，我国糖尿病的发生率在逐渐增高，且发病年龄

3、也在逐年降低，糖尿病在渐渐的称为了我国继心脑血管疾病、肿瘤之后的另一种严重危害人们健康的重要的慢性非传染性疾病［1］。其中，HLA-DR和DQ是与T1DM最为相关的HLA基因位点［2］。为了探讨HLA-DR3基因与胰岛素依赖性糖尿病的相关性，我们选用多聚酶链式反应(PolymeraseChainReaction,PCR)与顺序列特异寡核昔酸探针杂交(SequenceSpecificOligonucleotideProbeHybridization,SSOPH)的方法通过对DR3基因进行DNA水平上的定型来进一步研究DR3基因与胰岛素依赖型糖尿病及发病年龄的相关

4、性。现将本次实验报告如下。1资料与方法1.1资料整理选取在我院接受治疗的胰岛素依赖型糖尿病患者68例为实验组，其中男性患者31例，女性患者37例。年龄13岁〜47岁，平均年龄(33.1±14.2)岁。病程2.1年〜10.3年，平均(5.9±4.2)年。再选取与患者无血缘关系的健康人68例为对照组，要求健康人的年龄、性别与实验组一一对应，并用统计学方法检测要求两组数据在性别年龄上无统计学意义。采取每例对照组患者与每例实验组成员血液40ml,并保留其中20ml作为第一次样本。之后将实验组人员根据年龄再分成3个组,分别为甲组,乙组和丙组。甲组年龄小于18岁，共22人

5、；乙组年龄在18岁至30岁之间，共24人；丙组年龄在30岁以上，共22人。将之前抽好的血液剩下的20ml按照新分的组依次排好，然后等待实验。1.2实验方法1.2.1提取DNA：取200ul全血放入1.5ulEppendorf管中，加入2蛋白酶K和200nlBufferAL,涡旋15s后56°C水浴lOmino加入200u1无水乙醇，涡旋15s。全移至新管，8000rpm离心一分钟。再转至新管加入BufferAWl500111,8000rpm离心lmino转至新管加入BufferAW2500P1,14000rpm离心3mino转至新管加14000rpm离心lmi

6、no转至新管加入BufferAE200y1,室温5min后离心8000rpm一分钟，得到DNA备用。1.2.2PCR产物扩增：扩增DNA产物，然后用2%琼脂糖凝胶电泳方法检测扩增产物。1.2.3分析PCR产物：先做杂交膜准备，然后参照(DiG-11-duTP)标记试剂盒所示的方法(Beoch-inger,Mannhamain,BIM)进行探针标记斑点杂交染色。1.3统计学检验使用SPSS13.0统计学软件对实验所得的数据进行分析统计，采用x2检验和t检验，P